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PBRT 2.0 kit - PCR based replicon typing – New replicons P1, N2, FIB-KN, FIB-KQ, X4

PBRT2.0試劑盒-基于PCR的復制子分型-新的副本P1，N2，F(xiàn)IB-KN，F(xiàn)IB-KQ，X4

PBRT2.0試劑盒用于腸桿菌科細菌耐藥質粒的分子分型。

介紹

耐藥性質粒的流行病學是描述耐藥性擴散的一個主要問題。質?？梢愿鶕H緣關系劃分為家族。目前，利用PCR技術對質粒進行分子鑒定和分類是可能的，它的基礎是檢測質粒復制控制(復制)，即大的部分， 天然存在的質粒編碼復制酶基因(REP)和順式調節(jié)元件，控制質粒DNA復制和拷貝數(shù)。大多數(shù)復制者都是妖魔化的。 與質粒不相容有關(Couturier等人)。，因此，對其中一個復制子的檢測可能被解釋為該質粒的臨時分子分配給它的respec。 公司集團基于pcr的復制子分型(Pbrt)是一種有效的腸桿菌科質粒鑒定和分型方法，是由英國國立衛(wèi)生研究院的研究主任亞歷山德拉卡拉托利(Alessandra Carattoli)開發(fā)的。 e意大利羅馬國家衛(wèi)生研究所(Carattoli等人)。(2005年)，隨后由Diadiva工業(yè)化，。2005年PBRT方案在8個PCR反應中檢測到18個重復。近， 新的復制子和質粒類型的鑒定要求更新PBRT方案。pbrt2.0系統(tǒng)是一種基于PCR的檢測方法，它允許快速、簡便地對質粒進行定性和分子分析。 R識別通過副本檢測。該系統(tǒng)結合一種方便的格式，代表了一種有效的測試廣泛細菌菌株的工具，并被廣泛用于p的分類。 “在不同國家和環(huán)境中傳播耐藥性決定因素之后”(Carattoli A.等人，2009年)。PBRT2.0試劑盒提供了一套新的8s檢測方法 經優(yōu)化的8種多重PCRS擴增方法：HI1，HI2，I1，I2，X1，X2，X3，X4，L，M，N，F(xiàn)IA，F(xiàn)IB，F(xiàn)IC，F(xiàn)II，F(xiàn)IIs，F(xiàn)iik，F(xiàn)IB KN，F(xiàn)IB KQ，W，Y ，P1，A/C，T，K，U，R，B/O，HIB-M和FIB-M，代表主要質粒不親和群和在腸桿菌科細菌間循環(huán)的抗性質粒上鑒定的復制酶基因(Carattol)。 我等人。2005年，GarcíaFernández。等人2009年。加西亞-費爾南德斯。等人2012年，Villa等人。2010年)。表中提供了參考質粒的列表，其中包括PBRT試劑盒檢測到的每個復制子的一個。 下面是相關公司集團的指示。未分配給任何已知的Inc組的復制圖標在下表中報告為“未分配”。所有呼吸的陽性對照 ctive復制圖標包含在工具包中。

工具包內容

1倍聚合酶鏈反應m1：600μl

1 xPCR混合M2：600μl

1倍聚合酶鏈反應M3：600μl

1倍聚合酶鏈反應M4：600μl

1倍聚合酶鏈反應M5：600μl

1倍聚合酶鏈反應M6：600μl

1倍聚合酶鏈反應m7：600μl

1倍聚合酶鏈反應m8：600μl

1x陽性對照M1：凍干-15μl

1x陽性對照M2：凍干-15μl

1x陽性對照m3：凍干-15μl

1x陽性對照m4：凍干-15μl

1x陽性對照m5：凍干-15μl

1x陽性對照m6：凍干-15μl

1x陽性對照m7：凍干-15μl

1x陽性對照M8：凍干-15μl DNA聚合酶(5U/ml)：40ml(200 U)

免費水：1000μl

其他所需用品-·

一次性乳膠手套。·

精密吸管。

·無菌針尖。

·無菌1.5ml小瓶和0.2mlPCR無菌小瓶。·

臺面離心機。

在室溫下裝運條件對該組件的性能沒有不利影響。

將試劑盒存放在-20°C處，應避免反復凍融。對于停止使用混合存儲在工作別名是建議的。

PCR的一般預防措施

操作人員應始終注意：·保持嚴格分開的工作區(qū)域進行dna的提取和·的建立·使用帶過濾器的吸管提示；·儲存陽性材料(標本，對照)。 (和放大器)與所有其他試劑分開，如果可能的話，將其加入到分離空間中的反應混合物中；在啟動之前，·在室溫下解凍所有的組分和樣品。 assay; ·

冰上工作

重要事項

PBRT2.0試劑盒已在從不同樣本中分離出的大量細菌菌株上根據制造商說明書進行了驗證。已經證明*的引入 協(xié)議中的內容(例如，使用較少體積的母料)可能導致某些質粒放大失敗。

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