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上海起發(fā)實驗試劑有限公司
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invitek-molecular 土壤微生物dna提取試劑盒說明書
Instructions for useInvisorb® Spin Soil DNA Kit
該產品用于使用旋轉柱技術手動分離土壤樣品中微生物的DNA。
用戶實驗室設備提供的試劑和設備：
•微型離心機（所有方案均通過5415 D Eppendorf離心機驗證）
•可選：離心15或50 ml
•熱振動器（37°C-95°C）
•量筒（250 ml）
•一次性手套
•移液管和移液管尖
•渦流混合器
•反應管（1.5 ml、2.0 ml）
液體和溶劑：
•DNase/RNase游離水
•96-100%乙醇（非變性）
•異丙醇*
*用2-丙醇驗證試劑盒；Carl Roth的Rotipuran®>99.7%，p.a.，ACS，ISO（訂單號6752）
預期用途
Invisorb®旋轉土壤DNA試劑盒是一種基于旋轉柱技術的核酸提取試劑盒，用于從土壤樣品中分離和純化微生物DNA。相關的樣品材料，如降解的植物材料或沙子也可用于樣品提取。
該產品僅供專業(yè)人員使用，如實驗室技術人員、醫(yī)生和受過分子生物學技術培訓的生物學家。
純化DNA的產量和質量取決于細菌含量、樣品來源和儲存。土壤樣品的性質和成分差異很大。腐殖酸含量、植物降解產物的比例和許多其他參數(shù)影響微生物組成，從而影響DNA產量。典型產率為1–10µg。
下游應用：
分離的核酸的產量和質量通常適用于大量分子診斷應用，如PCR技術、微生物組分析（NGS）和雜交方法。下游應用應根據(jù)各自制造商的規(guī)范進行。
原則和程序
1.溶解樣品
土壤樣品在高溫變性條件下在裂解緩沖液P中裂解。
植物或動物源的生物材料在室溫下裂解，細菌細胞和其他微生物的生物材料通過在90°C下孵育而有效裂解，建議對難以裂解的細胞（如革蘭氏陽性菌）采用加熱步驟。此外，添加氧化鋯珠以提高裂解效率。
2.去除PCR抑制劑和蛋白質消化
裂解后，土壤中存在的DNA降解物質和PCR抑制劑被吸附到InviAdsorb基質上。InviAdsorb位于預先填充的安全鎖定管中，必須將裂解液放入其中。結合的污染物和細胞碎片通過離心法造粒。上清液含有預純化的DNA。
將蛋白酶K添加到上清液中以在高溫下消化和降解蛋白質。
3.結合核酸
通過向裂解液中加入結合緩沖液A，調節(jié)最佳結合條件。然后將每種裂解物應用于RTA旋轉過濾器，并將核酸吸附到膜上。
4.清洗以去除殘留污染物
使用洗滌緩沖液I和洗滌緩沖液II有效地洗滌污染物，同時核酸仍與膜結合。
5.洗脫DNA
使用50-100µl洗脫緩沖液從RTA旋轉過濾器中洗脫核酸。
