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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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abeomics 17-1101說(shuō)明書(shū)
螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
Leeporter™ 螢光素酶檢測(cè)試劑 - 1000 測(cè)試
產(chǎn)品編號(hào)：17-1101
| 應(yīng)用 ： | 功能分析 |
| 數(shù)量 ： | 1 個(gè)套件 |
| 內(nèi)容 ： | 1000 次測(cè)試（96 孔板格式）。檢測(cè)緩沖液含有 0.01% 疊氮化納。 |
| 儲(chǔ)存情況 ： | 儲(chǔ)存于 -20°C |
Leeporter™ 螢光素酶檢測(cè)試劑經(jīng)過(guò)專門配制，可與表達(dá)優(yōu)化的細(xì)胞內(nèi)海腎螢光素酶的 Leeporter™（螢光素酶報(bào)告基因）細(xì)胞系一起使用，該細(xì)胞系旨在產(chǎn)生高度敏感的信號(hào)和延長(zhǎng)的信號(hào)強(qiáng)度。作為一步發(fā)光檢測(cè)試劑，Leeporter™ 螢光素酶檢測(cè)試劑可以直接添加到與所使用的光度計(jì)兼容的細(xì)胞培養(yǎng)板中，無(wú)需稀釋或?qū)⑴囵B(yǎng)上清液或細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)移到其他板上。
協(xié)議：
1) 底物 (100X) 重構(gòu)：
將 0.5 ml 底物重構(gòu)溶液添加到凍干底物瓶中，通過(guò)輕輕上下吹打和/或倒置試管*溶解。重構(gòu)的 100X 底物可在 -20 o C 的黑暗環(huán)境中儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。
2) 檢測(cè)緩沖液：
在室溫水浴中解凍 50 ml 的檢測(cè)緩沖液，并通過(guò)旋轉(zhuǎn)和/或輕輕渦旋*溶解任何沉淀物，直到溶液變得澄清。Assay Buffer 可以分裝（例如每份 5-10 ml）并在 -20 o C 下保存數(shù)月。
3) 完整檢測(cè)溶液的制備（適用于 96 孔板格式）：
為每次使用新鮮制備完整的檢測(cè)溶液，應(yīng)在 2 小時(shí)內(nèi)使用。解凍檢測(cè)緩沖液并通過(guò)渦旋和/或溫和渦旋平衡至室溫。計(jì)算需要多少完整的測(cè)定溶液（注意：96 孔板的每個(gè)孔需要 50 ul 的完整測(cè)定溶液）。將適量的 Assay Buffer 分裝到 15 ml 試管中，并加入相應(yīng)量的重構(gòu) 100X 底物，制成最終的 1X 底物檢測(cè)溶液。
4) 螢光素酶檢測(cè)（96 孔板格式）：
1. 在白色實(shí)心底 96 孔微孔板（注意：使用的 96 孔板應(yīng)與正在使用的光度計(jì)兼容）中以 100 ul 細(xì)胞/孔，根據(jù)相應(yīng)的用于您的目標(biāo) Leeporter™ 細(xì)胞系的方案（注意：每個(gè)目標(biāo) Leeporter™ 細(xì)胞系方案都可以在其相應(yīng)的數(shù)據(jù)表中找到。）。[每孔總體積為 100 uL ]
2. 根據(jù)您的目標(biāo) Leeporter™ 細(xì)胞系的相應(yīng)方案刺激或處理您的目標(biāo)細(xì)胞。[每孔總體積變?yōu)?105~110 uL = 100 ul 細(xì)胞 + 5~10 ul 處理]
3. 完成目標(biāo)細(xì)胞的刺激/處理后，將含有待測(cè)目標(biāo)細(xì)胞的 96 孔板平衡至室溫 10 分鐘（注意：不要移除或擾亂細(xì)胞培養(yǎng)基。）。
4. 使用多道移液器，將 50 ul Complete Assay Solution 直接加入每個(gè)板孔中（注意：添加 Assay Reagent 時(shí)不要去除細(xì)胞培養(yǎng)基。所以 50 ul Assay Reagent 應(yīng)直接添加到孔上。每個(gè)孔的細(xì)胞培養(yǎng)。）。[每孔總體積變?yōu)?155~160 uL = 100 ul 細(xì)胞 + 5~10 ul 處理 + 50 ul 完整檢測(cè)溶液]
5. 使用 automix 2-3 秒，然后在 1-5 分鐘內(nèi)用光度計(jì)讀取板。（光度計(jì)設(shè)置示例：SpectraMaxL（Molecular Devices）：目標(biāo)波長(zhǎng)為 470nm，積分時(shí)間為 0.5 秒，自動(dòng)混合為 2 秒）。
僅供研究使用。不適用于診斷/治療程序。
