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FISH技術(shù)在白血病中的應(yīng)用

最近更新時間：2011-4-2

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熒光原位雜交（Fluorescence In Situ Hybridization, 簡稱FISH）由于其直觀, 快速, 敏感性高和方便靈活越來越得到廣泛應(yīng)用, 尤其是在血液學(xué)領(lǐng)域中. 因為白血病標(biāo)本比較容易取得和制備, 不同類型的白血病又往往有其特異的染色體異常, FISH在白血病診斷, 治療監(jiān)測, 預(yù)后估計和微小殘留病檢測等諸方面都正成為*的重要手段.
　　FIHS技術(shù)本身也在新的需求下不斷更新和完善.FISH的基本原理很簡單, 就是標(biāo)記了熒光的單鏈DNA（探針）和與其互補的DNA（玻片上的標(biāo)本）退火雜交, 通過觀察熒光信號在染色體上的位置來反映相應(yīng)基因的情況.
　　FISH探針按標(biāo)記方法可分為直接標(biāo)記和間接標(biāo)記: 用生物素（biotin）或地高辛（digoxingenin）標(biāo)記稱為間接標(biāo)記, 雜交后需要通過免疫熒光抗體檢測方能看到熒光信號, 因而 步驟較多, 操作麻煩, 其優(yōu)點是在信號較弱或較小時可經(jīng)抗原抗體反應(yīng)擴(kuò)大; 直接用熒光素標(biāo)記DNA的方法稱為直接標(biāo)記. 由于直接標(biāo)記的探針雜交后可馬上觀察到熒光信號, 省去了煩瑣的免疫熒光反應(yīng), 不再需要購買熒光抗 體, 也由于近年來熒光互的亮度和抗淬滅性的不斷改進(jìn)和提高, 直接標(biāo)記的熒光探針越來越成為, 如Vysis公司 的FISH探針均采用直接熒光標(biāo)記, 并采用多種不同顏色的熒光, 方便在同一標(biāo)本上同時檢測多鐘異常. 其熒光強度 和信號大小都易于在普通熒光顯微鏡下觀察, 操作過程中也不需要嚴(yán)格避光, 使FISH過程變得簡便而易于操作. FISH并不能取代傳統(tǒng)的白血病MCI診斷, 但它卻能使MIC分型更為準(zhǔn)確和深入. 我們知道, MIC即細(xì)胞形態(tài) 學(xué)（M）, 免疫學(xué)（I）和細(xì)胞遺傳學(xué)（C）, 三者結(jié)合對白血病進(jìn)行分型診斷, 對不同類型的白血病采用不同治療方案手段. 隨著人們對白血病的不斷認(rèn)識, 僅進(jìn)行MIC分型已不夠全面, 還要加上對白血病的分子（M）診斷, 成為MICM分型. FISH就是連接細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的橋梁.

　　白血病檢測中常用的FISH探針有單一序列探針, 著絲粒探針, 整條染色體探針, 常用方法有單標(biāo)記FISH, 雙 標(biāo)記FISH, 比較基因組雜交（CGH）, M-FISH 和Rx-FISH等. 各種FISH探針及方法均在白血病的診斷, 治療監(jiān)測, 預(yù)后估計和微小殘留病檢測中起重要作用:

　　1. 白血病診斷.
　　白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多白血病特異的染色體易位, 為疾病的診斷和特異治療提供了依據(jù). 目前, 大部分易位累及的白血病相關(guān)基因已經(jīng)被克隆, 可通過檢測些融合基因?qū)Π籽∵M(jìn)行分子診斷. 常見的單一序列探 針有PML-RAR?[t（15;17）, 見于M3, AML1-ETO[t（8;21）, 見于M2b], BCR-ABL[t（9;22）, 見于CML和ALL], - AML1[t（12;21）, 見于兒童前B-ALL]等等, 為方便起見, 商品化的探針多為標(biāo)記的, 即兩個基因分別用兩種顏色標(biāo)記, 同時在一張玻片標(biāo)本上雜交. 用FISH進(jìn)行融合基因檢測比常規(guī)的染色體核型分析要準(zhǔn)確, 其敏感性雖略低于RT- PCR方法, 但其假陽性和假陰性率卻大大低于PCR法. 若核型分析, RT-PCR, FISH三者結(jié)合則可大大提高白血病診 斷的準(zhǔn)確性.

　　常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)分析常有一些染色體易位不易發(fā)現(xiàn)或有不明來源的標(biāo)志染色體或有復(fù)雜的染色體易位不易診 斷. FISH則可解決這些難題. 白血病的染色體異常分為染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常. 對數(shù)目異常, 可采用染色體著 絲粒探針或整條染色體探針[又稱為染色體涂色（Chromosome painting, CP）探針]. 如慢性粒細(xì)胞性白血病急變時常常 出現(xiàn)8號染色體三體. 此時8號著絲粒探針或CP探針就很容易診斷了. 目前, 幾乎所有染色體均已有了商品化的著 絲粒和CP探針. CP探針也適用于標(biāo)志染色體和不易發(fā)現(xiàn)或復(fù)雜的染色體易位的檢測, t（12;21）的發(fā)現(xiàn)就是的例子. 染色體涂色往往要在核型分析的基礎(chǔ)上, 選擇可能發(fā)生異常染色體探針做雜交, 如果三條以上染色體發(fā)生復(fù)雜的交互 易位, 需要多次雜交分析才能確定.

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