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培養(yǎng)基與您分享293細(xì)胞的特性和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù)：1060 發(fā)布時(shí)間：2014-7-22
培養(yǎng)基與您分享293細(xì)胞的特性和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)
293細(xì)胞培養(yǎng)基的特性：
1、293細(xì)胞培養(yǎng)基明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時(shí),可順利貼壁生長, 換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。
2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細(xì)胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個(gè)懸浮細(xì)胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：3。
3、293細(xì)胞培養(yǎng)基在低代時(shí)容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團(tuán)，且貼壁不牢，用PBS沖洗時(shí)即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液，購入時(shí)先大量凍存。
4、復(fù)蘇293細(xì)胞的另一生長特性是貼壁所需時(shí)間長且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長滿瓶底的70%～80%時(shí)消化凍存,復(fù)蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢，復(fù)蘇接種后24小時(shí)內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動(dòng)而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時(shí)左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。
5、轉(zhuǎn)染：體外應(yīng)用293細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，如果是采用磷酸鈣轉(zhuǎn)染，一定要注意293細(xì)胞不要全部長滿細(xì)胞培養(yǎng)盤，長滿細(xì)胞時(shí)加入磷酸鈣就會(huì)使293細(xì)胞大片的脫落，是當(dāng)293生長到1/2或2/3時(shí)進(jìn)行磷酸鈣轉(zhuǎn)染，可以避免細(xì)胞的大量脫落。
實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分享：
1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營養(yǎng)的攝取
2、培養(yǎng)液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養(yǎng)基液，凍存在-20度，
3、要及時(shí)傳代，是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部，但是細(xì)胞之間還沒有*貼緊，總是多少有空隙的時(shí)候。
4、如果細(xì)胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養(yǎng)瓶不夠干凈，當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。
5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，方法是將明膠加入培養(yǎng)皿，使之浸泡到底面的各個(gè)部分，然后吸出，置超凈臺(tái)內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強(qiáng)。如果是新的塑料培養(yǎng)基瓶就不用處理。