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使用免疫親和柱需要注意哪些地方？

閱讀：2453      發(fā)布時間：2022-6-29
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免疫親和柱是利用抗原抗體特異性可逆結(jié)合特性的SPE技術(shù)，根據(jù)抗原抗體的高選擇性，從復(fù)雜的待測樣品中提取目標化合物。
 
免疫親和層析常見的用途是純化重組蛋白。免疫親和層析是從粗混合物中純化蛋白質(zhì)或核酸理想選擇。如果蛋白質(zhì)的分子量，疏水性，電荷等未知，親和色譜法仍可適用于這種情況。一個典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時，可以用與所選底物相似或相同的連接配體構(gòu)建親和柱。
 
免疫親和柱的使用要點：
 
1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無懸浮物、甲醇濃度不宜過高；
 
2、若樣品為復(fù)雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果；
 
3、樣品過柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴；
 
4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進行實驗；
 
5、不要在無水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥萎縮，影響質(zhì)量；
 
6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因為緩沖液凍結(jié)，會嚴重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對質(zhì)量影響很大；
 
7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強洗脫效果可加大甲醇體積；
 
8、樣液免疫凈化后，洗脫液過0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。

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