以中壓層析柱提取分離冬凌草甲素為例
1 吸附劑的處理及柱子裝填，將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個(gè)柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚（5：95）比例泵人溶劑，至溶劑流出止。
2 上樣 ，將冬凌草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解，泵人中壓柱柱頭，然后泵人石油醚1000RID。 　
3 洗脫，以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液，60ML／MIN的流速進(jìn)行梯度洗脫，柱的使用壓力為2～ 3KG／C 。按每份500ML收集，TLC檢識(shí)展開劑丙酮一氯仿（2：8），顯色劑5％香草醛濃硫酸乙醇液至洗脫*，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置，析出結(jié)晶，為冬凌草甲素。
4 層析柱再生、平衡有效成分經(jīng)TLC檢識(shí)全部流出后，用純丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚（5：95）平衡后，可再次上樣，反復(fù)使用（使用次數(shù)隨原料不同而異，一般可連續(xù)使用2—6個(gè)月以上）。
5 重結(jié)晶 　　冬凌草甲素結(jié)晶析出*后，減壓過(guò)濾，然后用少量甲醇洗滌（洗滌液保留，作下次熱溶冬凌草甲素用）。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結(jié)晶再次析出，待結(jié)晶*后，抽濾，用少量乙醚洗滌，將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6 薄層層析分析，取適量冬凌草甲素對(duì)照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解后點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿一丙酮（8：2）為展開劑進(jìn)行展開，5％ 香草醛濃硫酸乙醇液顯色，于105。C烘至斑點(diǎn)清晰。表明在該展開系統(tǒng)下，冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值，并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn)，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒(méi)有雜質(zhì)斑痕。
文章關(guān)鍵詞：中壓層析柱