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膠體電泳法檢定蛋白質

閱讀:815          發(fā)布時間:2010-7-1

電泳的高解析?使其成為生化技術中zui有效?的一門分析?器,以下簡?說明各種電泳的形式及其應用。

a. ?連續(xù)膠體電泳 (disc-PAGE) 是以原態(tài)蛋白質進?電泳,一般用作純?檢定或活性分析,SDS-膠體電泳 (SDS-PAGE) 則用為次體分子?的測定,梯?(gradient) 電泳則可輔助原態(tài)蛋白質分子?的決定。 結合SDS及梯?兩種特性的SDS-梯?膠體電泳,其解析?zui高。

b. 電泳形式 早期使用圓柱?膠體,演變成直?式的平板膠片 (16×18 cm),zui后改成迷你電泳膠片 (8×10 cm),電泳時間只約一小時,而其解析??變。現(xiàn)在柱?膠體電泳只用在等電焦集法,以進?二次元電泳;而大型平板電泳則多用在制備式電泳,一般電泳大多以迷你膠片進?的。

c. 膠體材質 的種類很多,但用在蛋白質者則以聚丙烯酰胺 (polyacrylamide) 為主;聚丙烯酰胺電泳是蛋白質應用zui廣的電泳分析方式。也有少數(shù)使用洋菜膠體 (agarose gel),多用在測定pI較廣的異構酶酶群。

d. 泳動?: 在pH 8.8 的電泳條件下,大部分pI 小于8.8 的分子均能往正極泳動;蛋白質的泳動?與所帶電荷成正比,而與其分子?成反比;?分子?一樣,但形?越?規(guī)則,或體積越松散者,泳動?越小。

e. 聚丙烯酰胺電泳 雖然分有原態(tài)的disc-及變性的SDS-PAGE 兩種,但兩者除?SDS-PAGE 在整個系統(tǒng)含有0.1% SDS 的外,其余*相同,且其鑄膠及電泳方法均屬大同小異。

f. 原態(tài)disc-PAGE 中的樣本蛋白質,因電泳系統(tǒng)中?含界面活性劑SDS,其活性多能保持,可以在膠體上做活性染色。 ?目標酶沒有方?的活性染色法,則可把膠體一片一片切下,做每一片膠體的活性測定。
 

 

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