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公司動態(tài)

藻紅蛋白作為熒光標記物具有的優(yōu)點

閱讀:2940          發(fā)布時間:2011-1-8
 
    藻紅蛋白或稱藻膽蛋白是一種來源于藻青菌(Cyanobacteria)和真核菌類相當穩(wěn)定的具有很強溶解性的熒光蛋白。這些蛋白質(zhì)含有共價連接的四吡咯基團(tetrapyrolegroup),其生物學(xué)作用是聚集光,通過熒光共振能源傳遞轉(zhuǎn)化成一對特殊的葉綠素分子,定位在光合反應(yīng)中心。
 
    因為具有光收集功能,藻紅蛋白的光吸收和發(fā)射熒光zui大,而內(nèi)部能量傳遞或外界pH值或離子組成對熒光猝滅影響降低到zui小。藻紅蛋白利用共價鍵結(jié)合的形式與抗體免疫球蛋白或其他蛋白質(zhì)結(jié)合,形成穩(wěn)定的復(fù)合。
 
    應(yīng)用其復(fù)合物進行免疫熒光組織化學(xué)、流式細胞儀和FISH的檢測,對抗原或DNA、RNA進行定量和定性分析,也是雙重標記或多重標記的熒光蛋白。
 
    藻紅蛋白作為熒光標記物具有以下優(yōu)點。
    ①具有強的長波長激發(fā)和發(fā)射熒光,可避免來自其他生物材料熒光的干擾;
    ②Stokes移位相當大,具*的發(fā)射量子產(chǎn)率;
    ③熒光不被外部試劑猝滅,通過與蛋白質(zhì)主鏈的共價結(jié)合, 熒光基團可被保護.
    ④具有非常高的水溶性;
    ⑤有明確分子質(zhì)量的齊性結(jié)構(gòu)(homogeneousstructure);
    ⑥與許多生物學(xué)或合成材料的多位點穩(wěn)定交聯(lián)。
    藻紅蛋白可分為D—藻紅蛋白(phycoerythin B;B-PE)、R—藻紅蛋白(R-PE)和異位(或別)藻藍蛋白(allophycocyamin;APC)。
 
    (一)藻紅蛋白的光譜特點
    各型藻紅蛋白的光量子產(chǎn)率高達o.98,消光系數(shù)高達2.4X106cm-1·m01.L-1。以lmol為基準,在可比較的波長,熒光產(chǎn)率等于至少30個未猝滅的熒光黃分子或100個羅丹明分子的熒光產(chǎn)率。
    (二)藻紅蛋白的應(yīng)用
 
    各型藻紅蛋白均有商品化產(chǎn)品,例如二抗標記的B-PE、R-PE和APC,生物素化的B—PE、R-PE和APC,親和素標記的B-PE、R-PE和APC產(chǎn)品。其敏感性APCzui高,其結(jié)合物的穩(wěn)定性B-PE比R-PE更好,但R-PE結(jié)合物的穩(wěn)定性可通過加入1—丙基沒食子酸鹽(propyl gallate)而增強??膳c其他綠色熒光素標記物進行雙重免疫熒光組化標記。

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