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膠體
閱讀：344 發(fā)布時間：2010-11-23電泳的高解析力使其成為生化技術中zui有效力的一門分析利器，以下簡略說明各種電泳的形式及其應用。
a. 不連續(xù)膠體電泳 （disc-PAGE） 是以原態(tài)蛋白質進行電泳，一般用作純度檢定或活性分析，SDS-膠體電泳 （SDS-PAGE） 則用為次體分子量的測定，梯度（gradient） 電泳則可輔助原態(tài)蛋白質分子量的決定。 結合SDS及梯度兩種特性的SDS-梯度膠體電泳，其解析力zui高。
b. 電泳形式 早期使用圓柱狀，演變成直立式的平板膠片 （16×18 cm），zui后改成迷你電泳膠片 （8×10 cm），電泳時間只約一小時，而其解析力不變?，F(xiàn)在柱狀電泳只用在等電焦集法，以進行二次元電泳；而大型平板電泳則多用在制備式電泳，一般電泳大多以迷你膠片進行的。
c. 材質 的種類很多，但用在蛋白質者則以聚丙烯酰胺 （polyacrylamide） 為主；聚丙烯酰胺電泳是蛋白質應用zui廣的電泳分析方式。也有少數(shù)使用洋菜 （agarose gel），多用在測定pI較廣的異構酶酶群。
d. 泳動率： 在pH 8.8 的電泳條件下，大部分pI 小于8.8 的分子均能往正極泳動；蛋白質的泳動率與所帶電荷成正比，而與其分子量成反比；若分子量一樣，但形狀越不規(guī)則，或體積越松散者，泳動率越小。
e. 聚丙烯酰胺電泳 雖然分有原態(tài)的disc-及變性的SDS-PAGE 兩種，但兩者除了SDS-PAGE 在整個系統(tǒng)含有0.1% SDS 的外，其余*相同，且其鑄膠及電泳方法均屬大同小異。
f. 原態(tài)disc-PAGE 中的樣本蛋白質，因電泳系統(tǒng)中不含界面活性劑SDS，其活性多能保持，可以在上做活性染色。 若目標酶沒有方便的活性染色法，則可把一片一片切下，做每一片的活性測定。