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轉化生長因子α（TGF-α）的測定
閱讀：1615 發(fā)布時間：2011-12-17轉化生長因子α（transforming growth factor-α，TGF-α）的結構和功能與TGF相似，屬EGF家族。檢測EGF生物學活性的方法也可以檢測TGF-α的活性。此外，EGF能誘導3T3小鼠的J2細胞合成DNA，TGF-α與EGF競爭受體，抑制EGF的作用，故可通過抑制EGF誘導的DNA合成試驗檢測TGF-α的活性。
1．將3T3J2細胞培養(yǎng)在含0．5％FCS的DMEM培養(yǎng)液中，用0．25％胰蛋白酶消化細胞，用細胞培養(yǎng)液洗滌細胞2次，并配成6×104／mL。
2．于24孔培養(yǎng)板每孔加入0．5mL細胞懸液，用細胞培養(yǎng)液作系列稀釋的TGF-a待測樣品或標準晶0．5mL、1nmol／LEGF和luCi（37kBp）3H-TdR，并設置單加EGF的陽性對照和高劑量TGF-a陰性對照，均設3復孔，總反應體積為lmL。
3．置37~C 5％C02溫箱中培養(yǎng)72h。用PBS洗3次，每孔加入5％三氯醋酸lmL沉淀DNA，再用甲醇洗孔1次，離心去甲醇溶液。加入lmLlmol／LNaOH，溶解細胞。將各孔細胞吸人閃爍液瓶中，在p-計數(shù)儀上測定各孔的cpm。根據(jù)標準曲線計算待測樣品中的TGF-a含量（活性）。