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美麗線蟲免疫染色的特殊性
閱讀：635 發(fā)布時間：2011-3-24美麗線蟲（caenorhabditis）抗原的免疫定位是一種比較新的方法，其基本原理遵循組織切片染色的原則，但美麗線蟲的角質膜透化處理給方法學帶來更大的困難。通過一系列的強烈固定和透化處理步驟，角質膜的問題亦可克服。但由于對這種線蟲免疫組化方面的研究起步較晚，時間相對較短， 目前僅有為數不多的可靠方法，能使抗體透過角質膜。其方法學尚有待進一步改進和完善。
1．擊破角質膜
由于角質膜的保護作用使該類線蟲的染色有一定困難。在幼蟲期這一問題尤其突出，特別是在I。1期，此期的蟲膜對透化作用的抗性zui強。通過*固定及凍融可使角質膜的二硫化物減少，從而使抗體能夠透過角質膜。在某些情況下，也可使用膠原酶處理角質膜。但這些方法都是比較強烈的，常常破壞抗原結構，尤其是凍融過程中冰晶的形成具有強烈的破壞性。在許多其他系統(tǒng)中，例如，對哺乳動物組織，并不推薦凍融，因為凍融可使組織和細胞受到破壞。在這種線蟲中，反復凍融的次數應盡可能減少。膠原酶的使用同樣有一些困難，每批膠原酶的作用不相同；每只蟲在發(fā)育的不同階段，其敏感性亦不同。因此，在對這種線蟲進行免疫染色時，應注意調整實驗的條件以適合形成抗原抗體復合物的所需量。
2．方法概述
實驗方案概括為在多聚甲醛／Bouin固定液中固定，通過凍融進行透化處理；在某些情況下也可通過膠原酶處理，或用還原劑處理以打開角質膜，然后加入抗體便可透過角質膜。對這種線蟲的免疫染色檢測可以使用熒光染料標記的二級試劑。
下面討論的實驗方案分為兩部分。*部分列出兩種固定方法；第二部分為抗體的加入和檢測步驟，這些對所有蟲體的染色程序都適用。在*部分中介紹Bouin液和多聚甲醛固定方法。如無特殊需要，推薦使用Bouin固定法作為起點。