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免疫組化步驟

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免疫組化步驟

1。4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中過夜。蠟塊制作。切片,貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后;
2。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液(甲醇80ml+0.01MKPBS 100ml+30%過氧化氫)30min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響,0.01MPBS清洗5min×3;
3。加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100+0.01MKPBS 100ml)30min,以增加細(xì)胞的通透性,0.01MKPBS清洗5min×3;
4。加入用血清稀釋液(牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+疊氮納0.08g)稀釋的一抗,4℃存放24-48h;吸去抗體,0.01MKPBS洗5min×3;
5。加入0.01MKPBS稀釋的的二抗,室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3;
6。加入ABC復(fù)合物之類的抗體,室溫孵育2h,0.01MKPBS洗5min×3;蒸餾水迅速沖三次;
7。加入顯色液,進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色,時(shí)間一般不超過30min,可不時(shí)在顯微鏡下進(jìn)行觀察,待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時(shí)馬上吸去顯色液,用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng);
8。梯度酒精脫水之后,封片,拍照。

 

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