elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!（轉(zhuǎn)）

時間：2009/5/11閱讀：3139

elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!
一般來講，實驗失敗應(yīng)當(dāng)是技術(shù)錯誤，設(shè)備損壞或反應(yīng)物失效。當(dāng)一個實驗失敗，檢查每個反應(yīng)物的有效期并且確定所有的反應(yīng)物均是按產(chǎn)品標(biāo)示的說明來存放的。另外，查看注意事項部分內(nèi)容。當(dāng)進行試驗時如果出現(xiàn)可疑的現(xiàn)象或發(fā)生問題，可以參照下表來分析問題。

可能問題	可能原因	采用措施
無顏色	漏加酶標(biāo)抗體	檢查操作流程，注意不要漏加
	酶標(biāo)抗體污染了疊氮鈉	應(yīng)嚴(yán)格避免疊氮鈉的污染
	不同試劑盒組份混用	檢查試劑標(biāo)簽，確認(rèn)所有組份屬于試劑盒中
顯色弱	產(chǎn)品已經(jīng)超過有效期	檢查產(chǎn)品有效期
	加入的試劑的體積和時間有誤	確認(rèn)所使用的每一個試劑的體積正確和加入的時間是符合說明書要求的
	試劑、樣品用前未能平衡	試劑、樣品用前置室溫平衡30分鐘
	孵育時間不足	檢查孵育時間
	在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標(biāo)板	確定孵育的溫度，避免溫度變化
	儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配	儀器是否設(shè)定正確，濾光片的使用是否正確
	使用了被污染的試劑	檢查試劑是否被污染
	拍板不*	經(jīng)拍板后板子要干
整板黃	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
	吸頭重復(fù)使用	吸頭應(yīng)一次性使用
	器材被污染	應(yīng)使用無污染的器材
	底物液被污染	更換底物液
高復(fù)孔比	洗板不*	洗板部分一定要做得*
	出現(xiàn)干板，沒有使用密封袋，密封袋重復(fù)使用	酶標(biāo)板應(yīng)保持濕潤，使用密封袋孵育，注意每步更換新的密封袋
	拍干不充分	經(jīng)拍板后板子要干
	孔內(nèi)加液體積不均等	確定移液器已校正并且工作正常，吸頭不得重復(fù)使用
	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
高本底	緩沖液污染	制備新鮮的緩沖液
	每孔加液體積不均等	確定移液器已校正并且工作正常
	洗板不*	洗板部分一定要做得*
	拍干不充分	經(jīng)拍板后板子要干
	試驗中孵育時間溫度和時間不適當(dāng)	確認(rèn)每一實驗步驟的孵育溫度和時間是否適當(dāng)
	酶標(biāo)抗體稀釋錯誤	確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確
	底物液受光照時間較長或污染	底物液應(yīng)在使用前打開，并避免強光照射
	吸頭重復(fù)使用	吸頭應(yīng)一次性使用
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差	標(biāo)準(zhǔn)加樣錯誤	確定移液器已校正并且工作正常
	酶標(biāo)抗體濃度過低	確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確
	酶標(biāo)板顯色孵育時間、溫度不足	按說明書要求操作
	操作不慎	回顧操作流程，嚴(yán)格按說明書要求操作

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