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中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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研域生物:酶標(biāo)抗體的質(zhì)量判定與保存

時(shí)間:2019/5/8閱讀:1911
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1.  酶活性和抗體效價(jià)測定

采用雙向免疫擴(kuò)散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反響檢測結(jié)合物中抗體效價(jià)和免疫沉淀線中的酶促反響。
  

2.  酶量和IgG量

酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4

IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62

其間,0.42為酶蛋白自身(0.3)及結(jié)合戊二醛后添加的OD值,0.94為抗體蛋白與醛化酶結(jié)合后,OD280 約添加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280 =1.0時(shí)為0.62.

過碘酸鈉符號(hào)法IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.3)′0.94′0.62

符號(hào)率= OD403 / OD280 =0.3-0.6,即一個(gè)抗體分子上結(jié)合1-2個(gè)HRP分子.符號(hào)率能夠大于0.6-0.9。OD403 / OD280 =0.4,約相當(dāng)于E/P=1.0。
 

酶標(biāo)抗體的保存
經(jīng)判定合格的酶標(biāo)抗體,因?yàn)榱蚧锛隘B氮化物等可與酶結(jié)合,使HRP失活,因而,不能用硫化物及疊氮化物作為防腐劑,可加入等量的60%甘油,小量分裝(0.5ml/支),置4℃~-30℃保存。

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