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在室溫中進(jìn)行ELISA試劑盒顯色定性測定

時(shí)間:2016/12/1閱讀:1323
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ELISA試劑盒此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內(nèi),陰性孔可堅(jiān)持無色,而陽性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)進(jìn)步溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中,參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。ELISA試劑盒時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制,有時(shí)可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色狀況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻,及時(shí)判別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37 ℃反響20-30分鐘后即不再加深,再延伸反響時(shí)刻,可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,顯色反響應(yīng)避光進(jìn)行,顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后,顯色由橙轉(zhuǎn)向棕。
TMB受光照的影響不大,ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺上,邊反響調(diào)查成果。但為確保實(shí)驗(yàn)成果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),隨即逐步削弱,至2小時(shí)后即可*衰退至無色。TMB的停止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色保持較長時(shí)刻(12-24小時(shí))不褪,是目視判別的杰出停止劑。此外,各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成,此刻可用特定的波長(450 nm)測讀吸光值。
ELISA試劑盒比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的實(shí)驗(yàn),需先將板置于規(guī)范96孔的座架中,才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊際剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。

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