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培養(yǎng)基如何消除組織培養(yǎng)的污染？
點(diǎn)擊次數(shù)：1609 發(fā)布時(shí)間：2016-5-6
培養(yǎng)基一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI- 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)的是AIM V培養(yǎng)基（SFM）。在開(kāi)始進(jìn)行新的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，如何消除組織培養(yǎng)的污染？可以參考下表所列的條件：
如何消除組織培養(yǎng)的污染？
當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi)，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過(guò)濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。
① 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。
② 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
③ 每天觀測(cè)細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
④ 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2－3代。
⑤ 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。
⑥ 重復(fù)步驟4。
⑦ 在無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4－6代，確定污染是否以已被消除。
培養(yǎng)基操作建議：
1、商品化的應(yīng)根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行儲(chǔ)存。標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有批號(hào)，生產(chǎn)日期、有效期及有關(guān)特性。所采用的保藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使限度失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。
2、配制好之后應(yīng)保存在2～25℃避光的環(huán)境。若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般在一年內(nèi)使用，瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷凍破壞凝膠特性。若要長(zhǎng)期保存，瓊脂平板應(yīng)密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分流失。
3、保存于密閉容器中，可防止水分流失以延長(zhǎng)保存時(shí)間。
4、滅菌后應(yīng)立即取出，不得儲(chǔ)藏在高壓菌器中，避免影響質(zhì)量。制備好之后應(yīng)保存在2～25℃、避光的環(huán)境。
5、固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進(jìn)行，只允許一次，融化后應(yīng)放在45～50℃的水浴中，不得超過(guò)8小時(shí)。