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單克隆抗體鑒定
點擊次數：1897 發(fā)布時間：2016-4-26
抗體的鑒定
對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的，應做下述幾個方面的鑒定：
1．抗體特異性的鑒定
除用免疫原（抗原）進行抗體的檢測外，還應該用與其抗原成分相關的其它抗原進行交叉試驗，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細胞的McAb，除用黑色素瘤細胞反應外，還應該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體，應首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應，其次是與其它細胞因子間有無交叉。
2．McAb的Ig類與亞類的鑒定
一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進行篩選時已經基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM，則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標準抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時，如加入適量的PEG（3%），更有利于沉淀線的形成。
3．McAb中和活性的鑒定
用動物或細胞的保護實驗來確定McAb的生物學活性。例如，如果確定抗病毒McAb的中和活性，則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細胞，來觀察動物或細胞是否得到抗體的保護。
4．McAb識別抗原表位的鑒定
用競爭結合試驗，測相加指數的方法，測定McAb所識別抗原位點，來確定McAb的識別的表位是否相同。
5．McAb親合力的鑒定
用ELISA或RIA競爭結合試驗來確定McAb與相應抗原結合的親合力。
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：
1、制備抗原。
2、選擇實驗動物。
3、動物免疫。
4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。