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技術文章
常用酶的配制
點擊次數(shù)：3055 發(fā)布時間：2009-12-11
常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20℃。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。
2．蛋白水解酶類
| | 貯存液 | 貯存溫度 | 反應濃度 | 反應緩沖液 | 溫度 | 預處理 |
| | 0.01mol/L Tris（pH7.8） | | ||||
| 鏈霉蛋白酶a | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 1mg/ml | 0.01mol/L EDTA | 37℃ | 自消化b |
| | 0.5% SDS | | ||||
| | 0.01mol/L Tris（pH7.8） | | ||||
| 蛋白酶Kc | 20mg/ml | -20℃（溶于水） | 50μg/ml | 0.005mol/L EDTA | 37～56℃ | 無須預處理 |
| | 0.5% SDS | | ||||
a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl（pH7.5）、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml濃度，于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個Ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機理并無直接關系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由于出現(xiàn)遠程的結構變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶K消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化對蛋白酶K具有較強耐性的蛋白，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca2+。
3．無DNA酶的RNA酶
將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris·HCl（pH7.5）、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的濃度，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20℃。