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正確選擇流式抗體及搭配熒光素
點擊次數(shù)：3259 發(fā)布時間：2011-10-27
選擇合適的流式抗體及流式抗體搭配熒光素的原則
如何選擇流式抗體:www.biomart.cn/runwell/index.htm
*、選擇流式抗體要看清楚抗的是你的目標蛋白質(zhì)，目標蛋白的物種不要搞錯了，有些抗體對好幾個物種的目標蛋白有反應(yīng)，重要的是對你的實驗有沒有影響。
第二、抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什么。以備不時之需，還是選擇你有匹配二抗。如果抗體還能夠做熒光染色啊，western blot啊用途多了更好。
第三、選擇流式抗體還要看熒光的顏色的選擇：一是你的流式儀一定要能讀，二是跟你需要counterstain的其他流式抗體錯開頻率。
第四、抗體的球蛋白亞型。因為要根據(jù)這個選擇isotype對照用抗體。每個抗體分子攜帶的熒光分子數(shù)量也要一樣才行。是一個isotype你的好幾個抗體都能用，就省了事了。
第五、到底能測試多少樣品。有些產(chǎn)品介紹沒說清楚，可以根據(jù)推薦的濃度計算一下。一是這樣才看出價格高低，二是根據(jù)自己需要選擇大支還是小支.買多了過期也是浪費。
另外，選擇流式抗體時還可以看制作抗體所用的抗原是什么，有的是腫瘤組織提取液，有的是重組蛋白，有的是肽鏈片斷。選用哪個跟你的實驗用途有關(guān)。有些蛋白質(zhì)有很多亞型，也要注意是否測試過跟那些亞型起反應(yīng)。
流式抗體搭配流式熒光素主要有2個原則：www.runwelltac.com
*，每個通道只能選擇1種熒光素。
第二，各個通道之間的熒光素可以隨意搭配，因此需要注意：
1、流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。以Calibur為例說明，Calibur的FL1通道選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC ，或者選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488。Calibur的FL3通道盡管能檢測PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個熒光素，但是我們搭配的時候只能選擇其中1個。
2、各個通道之間的熒光素可以隨意搭配：如果客戶的流式細胞儀能做4個通道，在第1個原則之下，那么每個通道隨便選出1個熒光素就可以組合成4個顏色。以2跟激光的Calibur為例，Calibur各個熒光素之間可以搭配出16種組合。比如常用的搭配是F I T C（ F L 1 ）＋P E（F L 2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 這個搭配組合可以更改成Alex Fluro（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+APC（FL4）, 或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PerCP（FL3）+Alex Fluro（FL4），或者FITC（FL1）＋PE（FL2）＋PE-Cy5（FL3）+APC（FL4）等等。總之，在第1原則之下，我們可以隨意搭配和組合各個熒光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的話，上流式以后，容易導(dǎo)致補償過度。