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技術(shù)文章
alamarBlue的用法
點(diǎn)擊次數(shù)：2713 發(fā)布時(shí)間：2010-12-3
alamarBlue的用法
| 貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞，因?yàn)槲⑸镂廴疽矔?huì)還原alamarBlueTM，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來說，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時(shí)，細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測(cè)的細(xì)胞，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上， 1、 細(xì)胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80％時(shí)，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個(gè)細(xì)胞。 3、 1個(gè)小時(shí)后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后檢測(cè)alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測(cè)的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測(cè)，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)其還原度。 |
| 貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞，因?yàn)槲⑸镂廴疽矔?huì)還原alamarBlueTM，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來說，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時(shí)，細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測(cè)的細(xì)胞，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上， 1、 細(xì)胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80％時(shí)，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個(gè)細(xì)胞。 3、 1個(gè)小時(shí)后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后檢測(cè)alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測(cè)的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測(cè)，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)其還原度。 |
| 貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞，因?yàn)槲⑸镂廴疽矔?huì)還原alamarBlueTM，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。 氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來說，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時(shí)，細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測(cè)的細(xì)胞，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上， 1、 細(xì)胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80％時(shí)，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個(gè)細(xì)胞。 3、 1個(gè)小時(shí)后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后檢測(cè)alamarBlueTM的還原情況 注意：若檢測(cè)的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測(cè)，這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)其還原度。 |
氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來說，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。
在特殊系統(tǒng)中使用時(shí)，細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。
收集需檢測(cè)的細(xì)胞，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上，
1、 細(xì)胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div>
2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80％時(shí)，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個(gè)細(xì)胞。
3、 1個(gè)小時(shí)后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng)
4、 到預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后檢測(cè)alamarBlueTM的還原情況
注意：若檢測(cè)的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測(cè)，這是該方法的一大*之處
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