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凝膠色譜柱的清洗和存放

閱讀:5675      發(fā)布時(shí)間:2016-8-3
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凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果。

凝膠色譜法又稱(chēng)分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用于高聚物的相對(duì)分子質(zhì)量分級(jí)分析以及相對(duì)分子質(zhì)量分布測(cè)試。目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛采用,不但應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究,而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。

那么,凝膠色譜柱應(yīng)該如何進(jìn)行清洗和存放呢?

1.色譜柱的清洗。為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來(lái)洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來(lái),洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動(dòng)相是緩沖溶液,則應(yīng)先用蒸餾水來(lái)沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來(lái)沖洗。

2.色譜柱的存放。如果色譜柱暫時(shí)不用,存放時(shí)要注意以下幾點(diǎn):a.幾天之內(nèi)的短期放置,凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。b.如果色譜柱長(zhǎng)期不用,僅用上述方法來(lái)處理就不行了,這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說(shuō)明書(shū)中所指明的溶劑來(lái)充滿(mǎn)色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長(zhǎng)則會(huì)使柱效降低,此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來(lái)沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長(zhǎng)期放置時(shí),一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán),以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰,這也將導(dǎo)致柱效的降低。

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