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紅酒中八種合成著色劑檢測

閱讀：1296 發(fā)布時間：2012-6-25

一、樣品信息

樣品組分	結(jié)構(gòu)式
檸檬黃
新紅
莧菜紅
靛藍(lán)
胭脂紅
日落黃
誘惑紅
亮藍(lán)

二．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

參照《食品中合成著色劑的測定》（GB/T5009.35-2003），建立紅酒中的合成著色劑的SPE-HPLC檢測方法。

三．實(shí)驗(yàn)方法

3.1實(shí)驗(yàn)試劑

l 乙酸；

l 甲醇；

l 乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000mL；

l 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混勻；

l 甲醇/甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混勻；

l 檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100mL溶解，混勻；

l 無水乙醇-氨水溶液-水：量取無水乙醇70mL，氨水溶液20mL、水10mL，混勻；

l 水（PH=6.0）：水加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)PH=6.0；

l 水（PH=4.0）：水加檸檬酸溶液調(diào)節(jié)PH=4.0；

l 水：超純水

l 合成著色劑儲備液：每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)各0.5mg，誘惑紅0.1mg的水溶液；

l 合成著色劑使用液：上述合成著色劑儲備液逐級稀釋成每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)各5μg，誘惑紅1μg的水溶液；

l Cleanert^® JXA SPE小柱：規(guī)格為1g/6mL，使用前經(jīng)5mL甲醇和5mL pH=6.0的水活化。

3.2.實(shí)驗(yàn)耗材

名稱	規(guī)格	訂貨號
Venusil^® XBP C18	5μm，100A，4.6*150mm	VX951505-0
保護(hù)柱芯	4.6*10mm，4/pk	VX950105-0
保護(hù)柱套	適用于4.6*10mm的保護(hù)柱芯	CH-100
Cleanert^® JXA	1g/6mL，30/盒	JXA0006
Hydrophilic PTFE	0.45μm，13mm，100/包	AS081345

3.3.試樣處理

取試樣（某品牌紅酒）20mL,加入合成著色劑混標(biāo)溶液1.0mL，混勻，用10%氨水調(diào)節(jié)PH約6.0，將全部試樣經(jīng)過Cleanert^® JXA柱，分別用水（PH=4.0）、甲醇/加酸（6+4）溶液6mL淋洗，再用10mL水淋洗，用乙醇-氨水溶液-水（7+2+1）6ml洗脫，收集洗脫液于50℃水浴蒸發(fā)至干，加水定容至1.0mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾，待測。

3.4液相色譜條件

色譜柱：Venusil^® XBP C18，5μm；4.6*150mm；

流動相：A：0.02mol/L的乙酸銨溶液（乙酸調(diào)節(jié)pH=4）；

B：甲醇

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：20μL；

波長：254nm；

梯度：

時間	A%	B%
0	95	5
10	80	20
18	40	60
25	40	60
25.01	95	5
40	95	5

四．實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1.添加5ppm混標(biāo)峰面積數(shù)據(jù)

樣品組分	標(biāo)品	標(biāo)樣過柱1	標(biāo)樣過柱2	紅酒樣品1	紅酒樣品2
檸檬黃	318	320	315	294	324
新紅	471	474	461	482	473
莧菜紅	266	269	262	277	279
靛藍(lán)	314	282	279	273	275
胭脂紅	266	267	263	246	240
日落黃	234	238	234	210	212
誘惑紅	33	33	33	35	34
亮藍(lán)	39	40	39	37	37

表2.添加5ppm混標(biāo)回收率數(shù)據(jù)

樣品組分	標(biāo)樣過柱1（%）	標(biāo)樣過柱2（%）	紅酒樣品1（%）	紅酒樣品2（%）
檸檬黃	100.6	99	92.5	102
新紅	100.6	97.8	102	100
莧菜紅	101	98.5	104	105
靛藍(lán)	89.8	88.8	86.9	87.5
胭脂紅	100.3	98.8	92.5	90.2
日落黃	101	100	90	90.6
誘惑紅	100	100	106	103
亮藍(lán)	102	100	95	95

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Cleanert^® JXA小柱和Venusil^® XBP C18液相色譜柱可以用于紅酒中的合成著色劑的檢測，該方法快速、準(zhǔn)確。

六、注意事項(xiàng)

l 紅酒樣品呈弱酸性，在上樣之前要將其pH值調(diào)節(jié)至6左右，保證小柱可對合成著色劑有良好地吸附；

l 若樣品酒精度過高，建議在上樣前對樣品進(jìn)行除醇處理；

l SPE小柱凈化過程中，要注意對流速的控制，建議控制在1mL/min左右；

l 洗脫液氮吹復(fù)溶后，應(yīng)選用水系濾膜過濾，防止因?yàn)V膜吸附造成樣品的損失，建議選用Agela Hydrophilic PTFE濾頭。

附錄：

圖1 5ppm混標(biāo)溶液

圖2 5ppm混標(biāo)過柱1

圖3 5ppm混標(biāo)過柱2

圖4 紅酒空白圖譜

圖5 5ppm基質(zhì)加標(biāo)1

圖6 5ppm基質(zhì)加標(biāo)2

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紅酒中八種合成著色劑檢測

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