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色譜小知識(shí) | 分離度基本要素:柱效、選擇性和保留度(內(nèi)附對(duì)比參照)

閱讀:648      發(fā)布時(shí)間:2024-12-2
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【飛諾美色譜】擁有良好的分離度是每一個(gè)色譜工作者都?jí)裘乱郧蟮氖虑椋@里我們會(huì)詳細(xì)介紹分離度基本要素在方法開發(fā)過程中的重要性以及與分離方程之間關(guān)聯(lián)性。相信這對(duì)新手和有經(jīng)驗(yàn)的色譜工作者都很有用。


分離方程被認(rèn)為有三個(gè)項(xiàng),它們各自反映了你的方法的柱效、選擇性和保留度。柱效對(duì)于在轉(zhuǎn)移到較短的色譜柱時(shí)保持方法的分離度至關(guān)重要。

下面是兩個(gè)GC分析色譜圖。我們可以發(fā)現(xiàn),較短的色譜柱對(duì)色譜柱的選擇性和容量的影響可以忽略不計(jì),在這兩個(gè)色譜圖中,內(nèi)徑(ID)和薄膜厚度保持不變。表1列出了我們應(yīng)該注意的變量。



表 1 – 分離度變量



tR=保留時(shí)間

t0=“色譜柱容積"或“死體積"時(shí)間

t’=調(diào)整后的保留時(shí)間(取決于色譜柱容積)

α=選擇性(兩個(gè)峰的峰尖之間的關(guān)系)

k=容量因子(相對(duì)于固定相和方法條件的固有保留)

N=理論塔板(代表分析物與固定相之間的相互作用)


這兩個(gè)色譜圖代表了在使用新柱(長(zhǎng)度正好是原始柱的一半)時(shí)保留時(shí)間和柱容積的比例效應(yīng)。最終的效果是,我們的分離方程中的“選擇性"項(xiàng)和“保留度"項(xiàng)保持不變,其數(shù)學(xué)結(jié)果如表2所示。

表2 – 選擇性和保留度的對(duì)比




使用較短的色譜柱實(shí)際上會(huì)減少可用的理論塔板的數(shù)量,因?yàn)樵谳^短的色譜柱上分析物與固定相相互作用的機(jī)會(huì)更少。這在第二張色譜圖中得到了證明,盡管在洗脫過程中,這些峰仍然能保持一定的峰形,但峰與峰之間的分離度降低了。


但如果在保持相比的情況下減小內(nèi)徑和薄膜厚度,從而提高柱效率(N),最終可以使我們的分離度恢復(fù)到原始方法的值。較窄的內(nèi)徑將增加分析物與固定相之間的相互作用頻率,而較薄的薄膜將增加分析物進(jìn)出固定相時(shí)的傳質(zhì)速率。在第三張色譜圖中,內(nèi)徑和薄膜厚度被減小,使得兩個(gè)分析物的峰更尖銳,兩個(gè)峰之間的分離度也就更高。




柱效(N)代表峰的尖銳度和分析物與固定相之間相互作用的機(jī)會(huì)。柱效的計(jì)算考慮了峰的寬度和峰的保留時(shí)間。早期洗脫的峰通常具有較窄的寬度,顯示出其較高的柱效并可以提高該峰與相鄰分析物的分離度。




一半高度(W1/2)處的峰寬即一半高度處的實(shí)際寬度


GC和LC中都有一些技巧可以在縮短色譜柱的同時(shí)保持效率。在GC(氣相色譜)中,你可以保持相比的同時(shí),減小內(nèi)徑和薄膜厚度,以增加分析物和固定相之間的相互作用的頻率和速度。在LC (液相色譜)中,更小的顆粒增加了相互作用的頻率,同時(shí)也增加了分析物進(jìn)出顆粒以及相關(guān)固定相的速度。


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