Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)原理檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Top-Downdànbáizhì組學(xué)是一種直接以完整dànbáizhì分子為分析對(duì)象的質(zhì)譜策略，其核心思想是不經(jīng)過酶解處理，直接對(duì)dànbáizhì進(jìn)行質(zhì)譜碎裂與測序，從而實(shí)現(xiàn)dànbáizhì的jīngzhǔn鑒定、翻譯后修飾（PTMs）檢測、剪接變體識(shí)別等。相比Bottom-Updànbáizhì組學(xué)，Top-Down 方法可在保留dànbáizhì原始修飾狀態(tài)（如翻譯后修飾、剪切異構(gòu)體等）的前提下，實(shí)現(xiàn)更全面的dànbáizhì鑒定與結(jié)構(gòu)解析。

一、Top-Downdànbáizhì組學(xué)基本原理

Top-Downdànbáizhì組學(xué)是一種以質(zhì)譜（MS）為核心的分析策略，通過直接將完整dànbáizhì引入質(zhì)譜儀中進(jìn)行離子化、分離和碎裂，以獲取dànbáizhì一級(jí)結(jié)構(gòu)信息、翻譯后修飾（PTMs）、異構(gòu)體等多維度信息。這種方法通常不涉及酶解步驟，與 Bottom-Up 中“先酶解再測肽段”的思路不同，Top-Down 強(qiáng)調(diào)的是對(duì)“原生dànbáizhì”的直接分析。

二、Top-Downdànbáizhì組學(xué)分析步驟

1、dànbáizhì提取與純化

從樣本中提取目標(biāo)dànbáizhì，通常需使用去鹽、緩沖液調(diào)節(jié)等步驟去除復(fù)雜背景成分，因 Top-Down 對(duì)樣品純度要求較高。

2、電噴霧電離（ESI）

使用軟電離方式（通常為ESI），將完整dànbáizhì轉(zhuǎn)化為帶多個(gè)電荷的離子形式，使其適合進(jìn)入質(zhì)譜分析。

3、質(zhì)譜檢測

（1）首*行一級(jí)質(zhì)譜（MS1）檢測，獲取完整蛋白的jīngquè分子量信息。

（2）選定目標(biāo)dànbáizhì離子后，進(jìn)行碎裂（MS/MS）操作。常用碎裂方式包括：

• CID（碰撞誘導(dǎo)裂解）

• ETD（電子轉(zhuǎn)移解離）

• ECD（電子捕獲解離）

這些技術(shù)能夠產(chǎn)生大量序列相關(guān)的離子（b/y 離子或c/z 離子），用于進(jìn)一步序列解析。

4、dànbáizhì序列解析

通過分析碎片離子圖譜，重建dànbáizhì序列、確定修飾位點(diǎn)、識(shí)別突變與異構(gòu)體。這一步通常依賴于專門的軟件工具和數(shù)據(jù)庫（如 ProSight, TopPIC 等）。

三、關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)

1、多電荷離子形成：完整dànbáizhì較大，需要形成多個(gè)帶電狀態(tài)以進(jìn)入高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行有效分離和檢測。

2、高分辨質(zhì)譜儀支持：例如 Orbitrap、FT-ICR 等，用于提供足夠精度來區(qū)分復(fù)雜的碎片離子。

3、碎裂機(jī)制選擇：選擇合適的碎裂方式（如ETD適合保留PTMs信息）以獲得豐富且高質(zhì)量的序列碎片。

四、Top-Downdànbáizhì組學(xué)的優(yōu)勢

1、識(shí)別dànbáizhì異構(gòu)體與變異形式（Proteoforms）

2、可區(qū)分同一基因表達(dá)出的不同修飾型dànbáizhì，適用于dànbáizhì功能調(diào)控研究。

3、jīngquè定位 PTMs

4、無需推斷修飾位置，能直接觀察翻譯后修飾的準(zhǔn)確位點(diǎn)和修飾類型。

5、避免酶解誤差

6、不依賴酶切效率，規(guī)避肽段冗余或缺失的誤判。

五、Top-Downdànbáizhì組學(xué)的挑戰(zhàn)與限制

1、分析通量低：難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模高通量分析。

2、對(duì)儀器要求高：需要jígāo分辨率與靈敏度的質(zhì)譜設(shè)備。

3、dànbáizhì溶解與離子化難度大：尤其是疏水性蛋白或高分子量蛋白。

六、應(yīng)用示例

1、單一蛋白研究：如分析某種激酶的多種修飾狀態(tài)；

2、蛋白藥物鑒定與質(zhì)量控制：檢測重組蛋白中的微小結(jié)構(gòu)變化；

3、jīngzhǔndànbáizhì組學(xué)：識(shí)別疾病中dànbáizhì修飾譜的變化；

4、dànbáizhì互作與復(fù)合體研究：分析復(fù)合蛋白中各子單元的修飾狀態(tài)。

Top-Down dànbáizhì組學(xué)是通過直接質(zhì)譜分析完整dànbáizhì，以實(shí)現(xiàn)對(duì)其序列、翻譯后修飾、變體和功能狀態(tài)的全面解析。在百泰派克生物科技，我們?nèi)诤?的 Orbitrap 質(zhì)譜平臺(tái)與定制化樣本前處理流程，可提供以下特色服務(wù)：高精度蛋白異構(gòu)體鑒定；jīngquè定位翻譯后修飾（磷酸化、乙?；龋慌浜?Bottom-Up 數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合dànbáizhì組解析，形成“Top-Down + Bottom-Up”聯(lián)用策略；提供靶向 Top-Down 方法開發(fā)支持，適用于生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)、藥物靶點(diǎn)鑒定等領(lǐng)域。

如果您正在探索更深層次的dànbáizhì結(jié)構(gòu)功能研究，或希望挖掘dànbáizhì翻譯后修飾的生物學(xué)意義，Top-Downdànbáizhì組學(xué)將是您的理想選擇。歡迎聯(lián)系我們，獲取定制化方案與技術(shù)咨詢。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

Top-Down蛋白質(zhì)組學(xué)原理檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹