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局部組織結(jié)構(gòu)熒光染料 HistoBright
- 公司名稱 富士膠片和光(廣州)貿(mào)易有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 日本
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/7/18 13:53:42
- 訪問次數(shù) 45
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供貨周期 | 一個(gè)月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
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可實(shí)現(xiàn)局部組織結(jié)構(gòu)可視化的熒光染料
HistoBright
HistoBright是一種可實(shí)現(xiàn)雙光子激發(fā)的環(huán)境響應(yīng)型膜染色熒光色素,組織滲透性優(yōu)異,可根據(jù)組織的局部結(jié)構(gòu)改變熒光特性,因此可實(shí)現(xiàn)高對(duì)比度的組織可視化。結(jié)合組織透明化處理和雙光子激光顯微鏡使用,可對(duì)組織塊進(jìn)行深度觀察和空間結(jié)構(gòu)分析。
※ 本產(chǎn)品基于高知大學(xué)和愛媛大學(xué)的研究成果,由funakoshi(株)生產(chǎn)并銷售。
※ 本產(chǎn)品僅供研究使用,研究以外的目的不可使用。
HistoBright 是一種環(huán)境響應(yīng)型熒光染料,可根據(jù)溶劑的極性顯示出大范圍的波長。應(yīng)用于透明化處理后的組織時(shí),熒光會(huì)響應(yīng)組織內(nèi)的微環(huán)境而發(fā)生變化,隨后配合雙光子激光顯微鏡即可清晰地觀察到組織結(jié)構(gòu)。
◆傳統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)分析方法和新型的三維組織結(jié)構(gòu)分析
傳統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)分析,是通過有色染料對(duì)組織進(jìn)行染色實(shí)現(xiàn)的,如蘇木精-伊紅(HE)染色法。而使用這些有色染料很難將組織塊整塊染色,一般需制成薄切片后再進(jìn)行觀察。但薄切片很容易丟失組織結(jié)構(gòu)的三維信息,因此需要制備大量切片才能重現(xiàn)三維結(jié)構(gòu)。
HistoBright是高知大學(xué)教育研究部的仁子陽輔博士合成的新型環(huán)境響應(yīng)型熒光染料(原著論文中的化合物名為PC),目前由愛媛大學(xué)醫(yī)學(xué)部的今村健志博士、村上正基博士、川上良介博士推進(jìn)開發(fā)應(yīng)用于三維組織結(jié)構(gòu)的熒光成像染料。HistoBright會(huì)聚集在生物膜上,并根據(jù)所在局部環(huán)境不同,熒光在綠光~近紅外光的大范圍內(nèi)變化。因此,當(dāng)HistoBright應(yīng)用于生物組織時(shí),它可以根據(jù)組織結(jié)構(gòu)誘導(dǎo)熒光色調(diào)的變化,從而實(shí)現(xiàn)高對(duì)比度觀察組織結(jié)構(gòu)。由于HistoBright能夠進(jìn)行雙光子激發(fā),因此除了激光共聚焦顯微鏡外,還可以使用雙光子激光顯微鏡進(jìn)行觀察。此外,配合組織透明化處理(除保持膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行脫脂操作的方法外),使用HistoBright可在不破壞組織結(jié)構(gòu)(不制備薄切片)的前提下觀察厚組織樣本,并通過雙光子激光顯微鏡進(jìn)行深度成像,實(shí)現(xiàn)組織的三維結(jié)構(gòu)分析。
◆特點(diǎn)
● 環(huán)境響應(yīng)型的膜染色試劑,能根據(jù)周圍環(huán)境表現(xiàn)出綠光~近紅外光的熒光特性。通過區(qū)分需要檢測(cè)的熒光波長范圍,可實(shí)現(xiàn)高對(duì)比度的局部組織結(jié)
構(gòu)可視化。
● 配合無脫脂處理的組織透明化處理(如RapiClear(SunJin Lab公司)、LUCID等),可實(shí)現(xiàn)深度的組織結(jié)構(gòu)三維分析。
● ※ 使用表面活性劑(Triton X-100、Tween 20等)會(huì)溶解組織中的脂質(zhì)膜,可能對(duì)HistoBright的染色產(chǎn)生影響,因此不推薦使用。如需使用,請(qǐng)討論適用條件。
● 使用激光共聚焦顯微鏡鏡(推薦激發(fā)光:488 nm激光)或雙光子激光顯微鏡(推薦激發(fā)光:960 nm激光)皆可進(jìn)行觀察。
● 使用雙光子激光顯微鏡觀察時(shí),可配合使用二次諧波發(fā)生(SHG)成像,在使用本試劑的同時(shí)觀察未染色組織中的膠原纖維。
● 使用HistoBright進(jìn)行染色和觀察后,可進(jìn)行HE染色。
◆原著原文
Inoue, K., et al., J. Mater. Chem. B., 10(10), 1641~1649 (2022). Synthesis and photophysical properties of a new push-pull pyrene dye with green-to-far-red emission and its application to human cellular and skin tissue imaging. [PMID:35194628]
◆原理
激發(fā)/發(fā)射光譜
HistoBright是一種根據(jù)溶劑的分子極性改變熒光特性的溶劑極性響應(yīng)型熒光染料(Solvatochromic fluorescent dye)。根據(jù)溶劑的極性,熒光會(huì)從綠色(低極性)向近紅外光(高極性)的范圍內(nèi)大幅變動(dòng)。
溶劑 | 最大吸收波長(nm) | 最大熒光波長(nm) | 熒光量子產(chǎn)率 |
Toluene | 424 | 546 | 0.82 |
EtOAc | 418 | 581 | 0.77 |
CHCl3 | 427 | 610 | 0.83 |
MeCN | 414 | 641 | 0.65 |
EtOH | 427 | 691 | 0.2 |
MeOH | 426 | 712 | 0.07 |
脂質(zhì)體膜模型中熒光光譜的變化
HistoBright對(duì)脂質(zhì)膜顯示高親和性,并根據(jù)脂質(zhì)膜的相態(tài)表現(xiàn)出不同的熒光特性。與有序相Lo模型(鞘磷脂(SM)/膽-固-醇(Chol))脂質(zhì)體中的熒光最大值不同,無序相Ld模型(DOPC)脂質(zhì)體中的最大波長也轉(zhuǎn)移到了約30 nm的長波長范圍,熒光量子產(chǎn)率也從0.72(SM/Chol)下降到了0.37(DOPC)。
※ 以上熒光光譜數(shù)據(jù)均由高知大學(xué) 仁子陽輔博士提供。
◆應(yīng)用數(shù)據(jù)
使用雙光子激光顯微鏡對(duì)透明化人正常皮膚組織進(jìn)行成像
使用4% paraformaldehyde/ PBS固定人正常皮膚組織塊后,制備成500 μm的切片,同時(shí)進(jìn)行76 h的組織透明化處理(LUCID)和HistoBright(10 μM)染色。通過雙光子激光顯微鏡,用960 nm處激光激發(fā)組織塊,分別在492 nm(SHG:青色)、500-550 nm(綠色)、560~593nm(橙色)和 593-690 nm(紅色)處分別獲取熒光圖像,制作以下4幅合成圖像。
※ 492 nm(青色)來源于組織中膠原纖維的SHG信號(hào),而非HistoBright來源的熒光信號(hào)。
接下來,使用雙光子激光顯微鏡在Z軸方向以5 μm的間隔連續(xù)拍攝500 μm的圖像,并使用圖像分析軟件進(jìn)行三維構(gòu)建,以三維方式將人皮膚組織的精細(xì)結(jié)構(gòu)可視化。
使用雙光子激光顯微鏡對(duì)透明化人正常皮膚組織進(jìn)行三維成像
使用4% paraformaldehyde/PBS固定人正常皮膚組織塊后,制備成1 mm的切片,同時(shí)進(jìn)行72 h的組織透明化處理(RapiClear、SunJin Lab公司)*、HistoBright(10 μM)染色和核染色(Hoechst33342)。通過雙光子激光顯微鏡,用1100 nm處激光激發(fā)組織塊,分別在<492 nm(SHG:青色)、500~550 nm(綠色)、560~593 nm(橙色)和 593-690 nm(紅色)處分別獲取熒光圖像,制作以下4幅合成圖像。基于以上條件,在Z軸方向以5 μm的間隔連續(xù)拍攝,使用圖像分析軟件進(jìn)行三維構(gòu)建,將連續(xù)的數(shù)據(jù)制作成動(dòng)畫。
* 本實(shí)驗(yàn)中的組織塊固定后未進(jìn)行透膜處理,直接透明化處理和染色。
真皮的觀察圖像 | 表皮的觀察圖像 |
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完整視頻請(qǐng)查看:labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1646.html
重復(fù)用于HE染色
使用HistoBright染色并觀察人正常皮膚細(xì)胞組織塊,在PBS中靜置,去除透明化試劑。然后制備成薄切片,進(jìn)行HE染色。已確認(rèn)HistoBright染色后,仍可進(jìn)行清晰的HE染色。
在激光共聚焦顯微鏡和雙光子激光顯微鏡下觀察染色
使用4% paraformaldehyde/ PBS固定人正常皮膚組織塊后,制備成0.5 mm的切片,同時(shí)進(jìn)行72 h的組織透明化處理(RapiClear、SunJin Lab公司)*和HistoBright(10 μM)染色。隨后,使用激光共聚焦顯微鏡鏡(左圖:激發(fā)光488 nm激光)和雙光子激光顯微鏡(右圖:激發(fā)光960 nm激光)進(jìn)行觀察。雖然兩幅圖像沒有明顯區(qū)別,但在雙光子激光顯微鏡下可以觀察到雙光子激發(fā)的SHG信號(hào)(膠原纖維)。
* 本實(shí)驗(yàn)中的組織塊固定后未進(jìn)行透膜處理,直接透明化處理和染色。
※ 以上圖像數(shù)據(jù)均由愛媛大學(xué) 川上良介博士提供。
◆產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
FDV-0051 | HistoBright | 0.1 mg |