肌鈣蛋白I心臟 - 人類

貓編號(hào) 8T53

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• 貓編號(hào)。

8T53

• 來源：

人類心肌組織。

從器官捐贈(zèng)者采集的血液樣本檢測(cè)結(jié)果顯示，其為乙肝表面抗原、HIV-1和HIV-2抗體、丙肝病毒和梅毒螺旋體陰性。

• 應(yīng)用程序：

TnI是肌鈣蛋白的抑制亞基，肌鈣蛋白是細(xì)肌絲調(diào)節(jié)復(fù)合物，賦予骨骼肌肌動(dòng)蛋白-肌球蛋白ATP酶活性對(duì)鈣的敏感性。

TnI 存在三種同工酶，一種對(duì)應(yīng)于慢肌骨骼肌，一種對(duì)應(yīng)于快肌骨骼肌，一種對(duì)應(yīng)于心肌。兩種骨骼肌 (skTnI) 和一種心肌 TnI 形式的氨基酸序列有 40% 的差異。此外，人類心肌 TnI 在其 N 末端區(qū)域有骨骼肌形式所沒有的額外氨基酸殘基，這使得這種蛋白質(zhì)成為指示心臟特異性的有前途的分析物。在心肌梗死 (MI) 發(fā)生后的前 15 小時(shí)內(nèi)，心肌 TnI 的釋放模式與 CK-MB 相似，但在血清中保持升高長達(dá) 6 天。這種觀察和心肌 TnI 的獨(dú)氨基酸序列使其成為 MI 的重要診斷標(biāo)志物。

TnI 適用于免疫檢測(cè)中的標(biāo)準(zhǔn)，用于早期檢測(cè)心肌梗死、生產(chǎn)抗血清的免疫原和標(biāo)記物用于碘化。

• 分析：

純度 > 98 % (SDS-PAGE)。

免疫印跡法用特異性單克隆抗體與肌鈣蛋白I心臟亞型反應(yīng)，確認(rèn)免疫活性。

TnI 濃度通過分光光度法測(cè)定，使用 A (0.1 %, 280 nm, 1 cm) 等于 0.42。該系數(shù)是根據(jù)人類 cTnI 的氨基酸組成 (FEBS Lett, 270, 57-61) 計(jì)算得出的。

• 展示：

從0.01 M鹽酸凍干。

建議用Tris/尿素緩沖液（20 mM Tris，pH 7.5，7 M尿素，5 mM EDTA，15 mM 2-基乙醇）將此產(chǎn)品重新溶解至接近1 mg/ml的濃度。

在中性pH值和生理鹽濃度下溶解度有限。

• 存儲(chǔ)：

凍干 -20°C（允許 -15 … -30 °C）
再溶解 -70°C（允許 -65 … -80 °C）

• 其他信息：

避免反復(fù)凍融。建議在重組成分后分裝。

• 材料安全注意事項(xiàng)：

此產(chǎn)品僅售用于研究或進(jìn)一步制造。處理此材料時(shí)應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作程序。

 技術(shù)說明

血液凝固與貧血•骨代謝•心臟標(biāo)志物•生育與妊娠•激素標(biāo)志物•免疫學(xué)與血清學(xué)•傳染病•炎癥•腎臟疾病•代謝綜合征•神經(jīng)科學(xué)•甲狀腺疾病•腫瘤標(biāo)志物•獸醫(yī)學(xué)

 嵌合型心肌肌鈣蛋白I抗體

與嗜異性抗體相關(guān)的問題已被認(rèn)知數(shù)十年。盡管對(duì)嗜異性抗體在普通人群中流行率的估計(jì)差異較大，但普遍認(rèn)為至少達(dá)到10%（1）。

當(dāng)人體接觸不同動(dòng)物或動(dòng)物源制品時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生嗜異性抗體。這些抗體通常為人類抗小鼠（HAMA）、抗兔、抗山羊、抗綿羊、抗牛、抗豬、抗大鼠或抗馬抗體。在免疫診斷領(lǐng)域，該問題最常與HAMA相關(guān)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)診斷檢測(cè)都使用小鼠源抗體。

 HAMA可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果

在診斷檢測(cè)中，HAMA可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果，有時(shí)也會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果（2-3）。假陽性結(jié)果是由HAMA對(duì)檢測(cè)抗體的交聯(lián)作用引起的，而當(dāng)HAMA與檢測(cè)抗體結(jié)合并由此阻斷抗原結(jié)合時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果（見圖1）。

![圖1. 人類抗小鼠抗體（HAMA）可在免疫測(cè)定中引起假陽性和假陰性結(jié)果。

假陽性結(jié)果可能會(huì)延誤正確診斷，若該檢測(cè)用于急性心肌梗死（AMI）等危及生命疾病的診斷，甚至?xí)?dǎo)致不必要的住院治療（4）。一項(xiàng)針對(duì)因疑似心肌梗死（MI）而接受心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)的受試者研究發(fā)現(xiàn)，HAMA在cTnI升高的受試者中導(dǎo)致5.5%的假陽性，在cTnI升高但肌酸激酶正常的受試者中導(dǎo)致14%的假陽性（5）。

為解決HAMA帶來的問題，大多數(shù)檢測(cè)方法制造商在檢測(cè)開發(fā)過程中會(huì)采取額外措施。常用的程序是使用阻斷試劑抑制非特異性結(jié)合，這些試劑從普通小鼠IgG到更精細(xì)的配方不等。盡管在大多數(shù)情況下這些措施是足夠的，但確實(shí)會(huì)在材料和人工方面增加額外成本。使用Fab片段也可以抑制HAMA的影響，但這同樣增加了一個(gè)生產(chǎn)步驟，并增加了每次檢測(cè)的成本。

 臨床應(yīng)用

急性心肌梗死的早期標(biāo)志物

 嵌合抗體有助于避免HAMA效應(yīng)

在診斷檢測(cè)中解決HAMA問題的一個(gè)有力工具是使用嵌合抗體或全人源化抗體。由于對(duì)臨界值要求低，且即使在AMI患者的血漿中cTnI水平也非常低，肌鈣蛋白檢測(cè)特別容易受到HAMA的影響。我們現(xiàn)在已通過將抗體恒定區(qū)從小鼠來源序列改為人類來源序列，將我們的兩種抗心肌肌鈣蛋白I（TnI）抗體轉(zhuǎn)化為嵌合蛋白。嵌合cTnI抗體Rec19C7和Rec16A11由負(fù)責(zé)抗原特異性的原始小鼠來源可變區(qū)和IgG1同種型的人類來源恒定區(qū)組成（見圖2）。

![圖2. Hytest嵌合cTnI抗體的示意圖

 同種型轉(zhuǎn)換對(duì)抗體性能無影響

天然19G7抗體的亞類為IgG2b，而嵌合RecChim19C7的亞類為IgG1。為了確定同種型轉(zhuǎn)換是否有任何影響，我們?cè)趲追N抗體組合中比較了天然和嵌合19C7的性能（見圖3）。結(jié)果證明兩種19C7形式的性能非常相似，觀察到的差異在15%以內(nèi)，這與批間變異系數(shù)一致。

![圖3. 同種型轉(zhuǎn)換對(duì)抗體19C7的性能沒有影響。

A）檢測(cè)步驟的示意圖。使用天然（左）或嵌合（右）19C7作為捕獲抗體，用Eu3?標(biāo)記的天然抗cTnI（560、MF4、625或560）作為檢測(cè)抗體，肌鈣蛋白復(fù)合物作為抗原。

B）如圖所示，在四種不同的夾心免疫測(cè)定中，將嵌合RecChim19C7（亞類IgG1）的性能與天然19C7（亞類IgG2b）進(jìn)行了比較。

 嵌合抗體可防止體外診斷檢測(cè)中的HAMA效應(yīng)

為驗(yàn)證嵌合抗體對(duì)HAMA效應(yīng)不敏感，使用從AMI患者獲得的含HAMA的血清樣本測(cè)試了嵌合抗體和天然抗體的不同組合的性能。血清樣本中的HAMA濃度范圍為807 ng/ml至6220 ng/ml（見圖4）。含HAMA最高的血清在所有基于天然抗體的組合中都產(chǎn)生了非常高的背景信號(hào)。同時(shí)，含HAMA較低的血清樣本產(chǎn)生了較低但顯著的背景信號(hào)。與此同時(shí)，所有使用嵌合抗體的檢測(cè)在所有測(cè)試的HAMA樣本中要么沒有背景信號(hào)，要么只有可忽略的背景信號(hào)。

![圖4. 嵌合抗體可減輕HAMA效應(yīng)。

使用三種不同HAMA濃度的血清樣本測(cè)試了嵌合和天然19C7及16A11在HAMA存在下的性能：樣本1中為807 ng/ml，樣本2中為1388 ng/ml，樣本3中為6220 ng/ml。使用不含血清的緩沖液作為對(duì)照。測(cè)試了以下免疫測(cè)定組合：4C2-19C7和4C2-RecChim19C7（A），4C2-16A11和4C2-RecChim16A11（B），以及19C7-16A11和19C7-RecChim16A11（C）。

該測(cè)試結(jié)果清楚地表明，使用嵌合抗體可以防止HAMA效應(yīng)，這使其成為解決這一常見問題的潛在新工具。

 訂購信息

單克隆抗體

|產(chǎn)品名稱|目錄號(hào)|單克隆抗體|亞類|備注|

|重組嵌合抗cTnI|RC4T21|RecChim19C7|IgG1|酶免疫測(cè)定|

|RecChim16A11|IgG1|酶免疫測(cè)定|

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