蛋白質(zhì)定量技術(shù)：方法、優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中，dànbáizhì被視為細(xì)胞功能的直接體現(xiàn)者。無(wú)論是探究疾病的分子機(jī)制，還是開發(fā)jīngzhǔn醫(yī)療方案，研究者都必須深入了解dànbáizhì在不同條件下的表達(dá)變化。因此，dànbáizhì定量技術(shù)逐漸成為生命科學(xué)研究中bùkěhuòquē的一環(huán)。

一、dànbáizhì定量的科學(xué)意義

dànbáizhì定量，即對(duì)特定生物樣本中目標(biāo)蛋白的豐度進(jìn)行數(shù)值化測(cè)量。在生理和病理過程中，蛋白表達(dá)常伴隨著顯著波動(dòng)，通過定量分析可以反映出基因表達(dá)后的實(shí)際功能狀態(tài)。與轉(zhuǎn)錄組或基因組數(shù)據(jù)相比，dànbáizhì水平的數(shù)據(jù)更加接近表型層面，是連接基因調(diào)控與細(xì)胞功能的關(guān)鍵橋梁。例如，兩個(gè)組織樣本即便在mRNA水平無(wú)明顯差異，但在蛋白水平上可能存在顯著表達(dá)失衡，這種“轉(zhuǎn)錄后調(diào)控”現(xiàn)象往往對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。

二、dànbáizhì定量方法概覽

當(dāng)前常用的dànbáizhì定量方法主要可分為三大類：基于標(biāo)記的方法、無(wú)標(biāo)記方法，以及靶向質(zhì)譜定量方法。不同策略適用于不同的研究目標(biāo)、樣本類型和預(yù)算考量。

1、基于同位素標(biāo)記的方法

??TMT/iTRAQ

TMT（Tandem Mass Tags）和iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantification）均屬于同位素標(biāo)簽定量技術(shù)，通過將不同樣本中的肽段打上不同的同位素標(biāo)簽，實(shí)現(xiàn)樣本在同一質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)中的并行分析。

優(yōu)勢(shì)：

• 可一次性分析8至16個(gè)樣本，效率高

• 數(shù)據(jù)一致性強(qiáng)，適合處理臨床隊(duì)列

• 常與高分辨率Orbitrap平臺(tái)聯(lián)用，提高定量精度

限制：

• 存在比值壓縮（ratio compression）：共洗脫干擾信號(hào)會(huì)影響定量準(zhǔn)確性。

• 成本較高：標(biāo)簽試劑價(jià)格昂貴。

• 對(duì)樣本質(zhì)量和酶解效率要求高，前處理復(fù)雜。

??SILAC

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）采用體內(nèi)標(biāo)記原理，直接將含13C或15N的氨基酸引入細(xì)胞培養(yǎng)中，生成“輕重肽”差異，適合細(xì)胞系蛋白表達(dá)動(dòng)態(tài)研究。

優(yōu)勢(shì)：

• 生物學(xué)背景統(tǒng)一，變異少

• 非侵入性，標(biāo)記效率幾乎100%

• 適合研究信號(hào)通路激活、蛋白互作動(dòng)態(tài)等

限制：

• 不適用于組織、體液等非培養(yǎng)類樣本

• 培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，且部分細(xì)胞系對(duì)標(biāo)記氨基酸適應(yīng)性差。

2、無(wú)標(biāo)記定量（Label-Free Quantification, LFQ）

LFQ是目前應(yīng)用zuì廣泛的dànbáizhì定量策略之一。它不需要任何化學(xué)或同位素標(biāo)簽，而是依賴于肽段在質(zhì)譜中的離子強(qiáng)度或譜圖數(shù)進(jìn)行相對(duì)定量。

優(yōu)勢(shì)：

• 樣本處理流程簡(jiǎn)單，成本低

• 樣本類型兼容性強(qiáng)（適用于血清、組織、細(xì)胞、外泌體等）

• 適合開展大規(guī)模樣本探索研究

限制：

• 定量精度受質(zhì)譜穩(wěn)定性影響大：對(duì)LC-MS/MS平臺(tái)一致性要求高。

• 動(dòng)態(tài)范圍有限：極低豐度蛋白可能被漏檢。

• 批間差異需嚴(yán)格控制，通常需設(shè)置內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)或偽重抽樣策略以提升可信度。

3、靶向定量

當(dāng)研究進(jìn)入蛋白驗(yàn)證階段，尤其需要高特異性與高重復(fù)性的定量方法時(shí)，MRM（Multiple Reaction Monitoring）和PRM（Parallel Reaction Monitoring）成為shǒuxuǎn。

??MRM

MRM常用于蛋白驗(yàn)證與臨床轉(zhuǎn)化研究。其原理是通過選擇性地監(jiān)測(cè)特定肽段及其碎片離子的特征對(duì)，實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)。

優(yōu)勢(shì)：

• 極低的背景干擾

• 良好的定量線性范圍

• 適合juéduì定量，結(jié)合內(nèi)標(biāo)后可提供ng/mL級(jí)別的精度

限制：

• 建立方法復(fù)雜：需針對(duì)每個(gè)目標(biāo)肽段進(jìn)行優(yōu)化。

• 一次性分析蛋白數(shù)量有限：通量受限于質(zhì)譜循環(huán)速度。

• 不適合探索性研究，僅適用于已知目標(biāo)。

??PRM

PRM利用高分辨質(zhì)譜全面掃描目標(biāo)肽段的所有碎片離子。

優(yōu)勢(shì)：

• 分辨率高，干擾更少。

• 數(shù)據(jù)更全面，便于后期數(shù)據(jù)驗(yàn)證與復(fù)用。

• 適合靶標(biāo)驗(yàn)證與轉(zhuǎn)化研究過渡階段。

限制：

• 對(duì)儀器性能要求高：需高分辨率質(zhì)譜支持。

• 數(shù)據(jù)分析較為復(fù)雜，對(duì)信息學(xué)工具依賴程度高。

三、dànbáizhì定量的典型應(yīng)用場(chǎng)景

1、疾病分子機(jī)制研究

通過分析患者與正常對(duì)照樣本中的蛋白表達(dá)差異，可揭示疾病關(guān)鍵通路及核心調(diào)控節(jié)點(diǎn)。例如，乳腺癌亞型間蛋白表達(dá)譜存在顯著差異，為jīngzhǔn分型和治療靶點(diǎn)識(shí)別提供理論依據(jù)。

2、生物標(biāo)志物篩選與驗(yàn)證

從Discovery階段的大規(guī)模篩選（如LFQ或TMT），到PRM/MRM驗(yàn)證，蛋白定量技術(shù)構(gòu)成了完整的標(biāo)志物研究鏈條，推動(dòng)基礎(chǔ)成果向臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化。

3、藥物作用機(jī)制與療效評(píng)估

在藥物研發(fā)中，研究者常利用蛋白定量分析藥物處理前后的蛋白變化，揭示其作用靶點(diǎn)、影響通路，評(píng)估療效和毒性。

4、微生態(tài)與免疫互作研究

蛋白定量結(jié)合代謝組與轉(zhuǎn)錄組等技術(shù)，能夠系統(tǒng)地剖析宿主-微生物-免疫系統(tǒng)間的相互作用，已廣泛應(yīng)用于腸道疾病、自身免疫病研究中。

從揭示細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制，到識(shí)別臨床診斷標(biāo)志物，再到推動(dòng)個(gè)體化治療策略建立，蛋白定量的價(jià)值正日益凸顯。無(wú)論是高通量的iTRAQ/TMT、靈活便捷的LFQ，還是jīngquè靶向的MRM/PRM，不同dànbáizhì定量方法在各自應(yīng)用場(chǎng)景中都展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢(shì)。百泰派克生物科技基于優(yōu)良的質(zhì)譜平臺(tái)與成熟的數(shù)據(jù)分析體系，為科研人員提供靈活、高效、定制化的定量蛋白組分析服務(wù)，助力您的每一次科學(xué)發(fā)現(xiàn)更進(jìn)一步。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)定量技術(shù)：方法、優(yōu)勢(shì)與應(yīng)用檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹