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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>71501 miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

71501 miRNA Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
  • 品牌 NobleRyder/諾博萊德
  • 型號 71501
  • 產(chǎn)地 北京
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2025/4/23 17:24:29
  • 訪問次數(shù) 160

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      北京諾博萊德科技有限公司成立于2012年,是一家致力于各類生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、小分子抑制劑、液體試劑等相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)與銷售的企業(yè), 旗下?lián)碛小癗obleRyder自主品牌”。公司產(chǎn)品種類齊全,庫存量充足,旨在為全國乃至于世界各地科研機(jī)構(gòu)、工業(yè)、電子、醫(yī)療、科技等領(lǐng)域的客戶, 提供系統(tǒng)的產(chǎn)品資源及配套技術(shù)服務(wù)。 NobleRyder秉承博采眾長、誠信為本、德行天下的宗旨服務(wù)于客戶。公司合作單位及客戶包括各大醫(yī)院、科研機(jī)構(gòu)、大專院校、制藥單位、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)單位、衛(wèi)生防疫、生物技術(shù)公司、食品單位等諸多領(lǐng)域,正逐步成長為優(yōu)秀的生化試劑和耗材供應(yīng)商。





生化試劑,緩沖液,抗體,試劑盒,分子生物學(xué)試劑,細(xì)胞培養(yǎng)基,血清

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 500rxn(20μl/rxn)
貨號 71501 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 用于所有qPCR儀,使用qPCR Mix時(shí)不需要額外添加ROX來校正儀器。

諾博萊德 miRNA Universal SYBR qPCR Mix  熒光定量


2x miRNAUniversal SYBR qPCR Mix (莖環(huán)法)

目錄號:71501

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

71501-500

500 rxns(20 μl/rxn)

71501-2500

2500 rxns(20 μl/rxn)

2x miRNA Universal SYBRqPCR Mix

1 ml x5

1 ml x25

保存條件

-20℃保存,有效期 24 個(gè)月。

使用前,充分融解,輕輕顛倒混勻,短期使用可放在 4 ℃,避免反復(fù)凍融。


具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)


產(chǎn)品簡介

2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix(莖環(huán)法)是專門為莖環(huán)法miRNA定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR檢測試劑,其中的DNA polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動(dòng)形式, 配合特殊的Buffer 體系,使反應(yīng)特異性更好,靈敏度更高,并能在更廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

預(yù)混液中含有通用型ROX,適用于所有qPCR儀,使用qPCR Mix時(shí)不需要額外添加ROX來校正儀器。

需要自備的試劑:

待檢測miRNA對應(yīng)的qPCR的引物

Realtime 上游引物設(shè)計(jì):

miRNA序列除去3’端6個(gè)堿基 的剩余部分作為上游引物,如miR-1的上游引物為(注意 把U改為T):TGGAATGTAAAGAAGT.檢查引物的Tm 值(一般參考DNAMAN),如果Tm值較低,則在5’端加GC使Tm值接近60度。因此miR-1的上游引物可設(shè)計(jì) 為:GCGCTGGAATGTAAAGAAGT,61.4度。

下游引物是通用的,序列為GTGCAGGGTCCGAGGT。

引物設(shè)計(jì)好后,需要通過預(yù)試驗(yàn)檢測引物的特異性。一般需要做溶解曲線來檢測引物的特異性;同時(shí)最好將PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測產(chǎn)物是否單一(產(chǎn)物長度很短,需要3%以上的瓊脂糖膠)

操作步驟:

1. 在室溫融化2x miRNA qPCR Mix、primer(10μM)、DNA模板、ddH2O,并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系:(以20μl反應(yīng)體系為例)

Components

Volume (20μl)

Final Concentration

2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix

10 μl

DNA Template

Variable

As required

Forward Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

ddH2O

Up to 20 μl

Not applicable

1) 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系,cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%。

2) 對于特殊的檢測體系中,高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,根據(jù)所檢測miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂宑DNA(10倍或者100倍)。

3) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果,反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。

擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

 


3. qPCR反應(yīng)程序

注意:

1) 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng),絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說,二步法擴(kuò)增特異性高,三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度;如果因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),可嘗試加長延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。

2) 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;

3) 延伸(退火&延伸)時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整。

4) 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。


miRNA Universal SYBR qPCR Mix  熒光定量



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