產(chǎn)品簡介：

4×LAMP MasterMix（熒光染料法）含有熒光染料法 LAMP 擴(kuò)增所需的所有成分，可以用于熒光染料實(shí)時(shí) LAMP 等溫?cái)U(kuò)增。LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增），它利用 4 條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(65℃左右) 30－60 分鐘完成擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于定性PCR 技術(shù)，同時(shí)還不需要昂貴的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測， 廣泛用于各個領(lǐng)域。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有本公司開發(fā)的 LAMP 專用熒光熒光染料，比常規(guī)的 SYBR 更好，不會產(chǎn)生抑制。

2.在熒光定量 PCR 一起上進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，可以實(shí)時(shí)跟蹤擴(kuò)增過程，但不宜用于定量（這是 LAMP 技術(shù)決定的）。

3.高特異性，精心優(yōu)化的配方，非特異擴(kuò)增比自配的試劑更低。

4.高靈敏度，一般比 PCR 靈敏一個數(shù)量級（取決于引物的篩選）。

5.4×MasterMix，最多可加入 14uL 模板，降低漏檢率。

6.本試劑盒足夠 50 次 20uL 體系的 LAMP 擴(kuò)增。

7.提供擴(kuò)增對照，便于在遇到困難時(shí)分析原因。

8.本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝

4×LAMP MasterMix

（含熒光染料，待加酶）200uL0.5mL 綠蓋管

Bst DNA 聚合酶 2.050uL0.5mL 紅蓋管

LAMP 陽性對照

模板-引物混合物50uL0.5mL 黃蓋管

使用手冊1 份無

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

LAMP 模板、LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板DNA：用于選用合適的方法制備模板DNA。如果有N個樣品，最好設(shè)置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。

2.配制自備的20×LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到下表所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水， 最后得到0.1mL的20×LAMP引物混合液，此混合液足夠100次20uL體系的LAMP擴(kuò)增。如果需要配制的20×LAMP引物混合液體積異于0.1mL，則各成分的用量請按比例調(diào)整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

注：如果沒有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化4×LAMP MasterMix（含熒光染料，待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時(shí)， 請將50uL Bst DNA聚合酶2.0 全部加入到4 ×LAMP MasterMix中輕柔混勻，然后再使用。如果有N個樣品，則在N+2個反應(yīng)管中加入以下組份，多出的一管是LAMP擴(kuò)增陽性對照（PC），一管是LAMP 擴(kuò)增陰性對照（NC）：

4.混勻，置于熒光定量PCR儀器中65℃保溫60分鐘，每分鐘采集一次SYBR 通道的熒光信號。如果熒光定量PCR儀不能設(shè)置恒溫?cái)U(kuò)增參數(shù)，可以把變性復(fù)性和擴(kuò)增三個溫度都設(shè)置為65℃，三個步驟的總時(shí)間為1分鐘即可，共60 個循環(huán)，在任何一步采集熒光信號即可。

5.結(jié)果分析：實(shí)驗(yàn)有效性判定。如果兩個陽性對照能夠得到標(biāo)準(zhǔn)的S型擴(kuò)增曲線而兩個陰性對照都沒有擴(kuò)增，則實(shí)驗(yàn)有效，才有必要對樣品進(jìn)行分析。如果陽性對照沒有出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，則說明試劑盒可能失效，實(shí)驗(yàn)無效。如果陰性對照有S型擴(kuò)增曲線，則說明LAMP引物設(shè)計(jì)得不好，有非特異擴(kuò)增， 需要重新優(yōu)化引物。也可能是環(huán)境或試劑有污染，實(shí)驗(yàn)無效。遇到實(shí)驗(yàn)無效的情況，請跟廠家客戶聯(lián)系，分析原因后再恢復(fù)實(shí)驗(yàn)。

6. 如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析樣品。凡是有S擴(kuò)增曲線的，可以判斷為陽性。凡是沒有S擴(kuò)增曲線的，可以判斷為陰性。典型的熒光檢測結(jié)果見下圖。左邊為陽性結(jié)果，擴(kuò)增曲線為S型，右邊為陰性結(jié)果，擴(kuò)增曲線不呈S型。

選擇我們的4×LAMP MasterMix（熒光染料法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！