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牛血清或血漿中巴貝蟲 IgG 抗體的 IFA 測試

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牛血清或血漿中巴貝蟲 IgG 抗體的 IFA 測試


病理學

牛巴貝蟲病是一種蜱傳原生動物疾病,在歐洲的養(yǎng)牛場中具有相當大的經濟意義。該病由牛巴貝蟲和雙巴貝蟲引起,由 Boophilus spp 的蜱傳播。

巴貝西蟲病是紅細胞的感染。巴貝蟲屬包括一組具有三個生命周期的單細胞生物,包括蜱蟲的有性繁殖、蜱蟲唾液腺中傳染性孢子的形成以及脊椎動物紅細胞中通過二分叉的無性繁殖。已經描述了一些巴貝蟲屬的蜱蟲垂直傳播。至于牛巴貝蟲,對于 Babesia bigemina,牛的傳播是通過胎盤進行的。

檢測原理

底物載玻片由含有固定紅細胞的特氟龍掩蔽孔組成,這些紅細胞被 Babesia bigemina 感染并包含特征性的細胞質裂殖子。

將牛血清用緩沖鹽水稀釋,并在各個玻片孔中孵育,以使患者抗體與孔上的巴貝蟲抗原發(fā)生反應。

然后洗滌載玻片以去除未反應的血清蛋白,加入熒光標記的 FITC 抗牛 IgG(偶聯(lián)物)。該偶聯(lián)物有時間與抗原-抗體復合物反應。再次洗滌載玻片以去除未反應的偶聯(lián)物。所得反應可以使用標準熒光顯微鏡進行可視化,其中陽性反應在每個孔中被感染的紅細胞的細胞質內顯示為清晰定義的蘋果綠色熒光裂殖子。陰性反應表現(xiàn)為紅色復染細胞或熒光,這與陽性對照孔中不同。

然后,可以以更高的稀釋度重新測試陽性反應,以確定最高的反應性(終點滴度)

樣品

牛血清或血漿樣品。

收集后,一旦發(fā)生凝固,通過離心分離血清。然后將血清或血漿轉移到無菌管中,無菌管可以儲存在 + 2-8°C 下。如果超過 5 天后進行檢測,樣品應在 -20°C 或更冷溫度下冷凍。從急性受試者身上采集的樣本必須在疾病發(fā)作時收集;可以每隔 2 周和 4 周采集額外的樣本,以檢測恢復期抗體滴度的任何變化。

結果

結果可以用帶有 FITC 濾光片的熒光顯微鏡以 400 倍放大倍率讀取。

陰性對照和陽性對照的熒光模式(形狀、密度等)應被視為參考模型。
除對照中存在的反應性模式外,應被視為非特異性反應(陰性結果)。

抗巴貝蟲 bigemina 抗體的存在取決于所分析的地理區(qū)域和人群。

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