Thermo Fisher（賽默飛）Countess 3 FL細胞計數(shù)儀——光立方與GFP檢測的結(jié)合

Countess 3 FL細胞計數(shù)儀與光立方概念

賽默飛的Countess 3 FL細胞計數(shù)儀是一款高度智能化、支持多通道熒光檢測的自動細胞計數(shù)儀。光立方（Light Cube） 是該儀器中的一個核心技術(shù)組件，用于支持多種熒光染料的高效檢測和分析。光立方內(nèi)置了激發(fā)光源和熒光濾光片，能夠針對特定熒光信號（如 GFP）進行靈敏捕獲和分析。

• GFP（Green Fluorescent Protein，綠色熒光蛋白） 是熒光生物標記中的分子，廣泛應(yīng)用于基因編輯、細胞轉(zhuǎn)染和標記特定細胞亞群等實驗。

• Countess 3 FL通過其光立方技術(shù)，可以精準檢測 GFP 發(fā)出的綠色熒光信號，實現(xiàn)對 GFP 標記細胞的高效篩選與計數(shù)。

光立方的原理與功能

光立方是Countess 3 FL儀器中負責(zé)熒光檢測的核心模塊。它包括以下兩個關(guān)鍵部件：

1. 激發(fā)光源：

• 為熒光染料提供激發(fā)能量，常使用LED作為激發(fā)光源。

• GFP的激發(fā)光波長范圍為 470 nm（藍光）。

2. 熒光濾光片：

• 用于選擇性捕捉熒光染料發(fā)射的特定波長。

• GFP的發(fā)射光波長為 510 nm（綠色光），光立方會精準過濾出這一波長的熒光信號。

光立方的特點：

• 靈活性強：不同的光立方可對應(yīng)不同的熒光標記染料（如 GFP、RFP、DAPI 等），用戶可以根據(jù)實驗需求進行快速更換。

• 精確性高：每個光立方經(jīng)過嚴格校準，能夠高效分辨微弱熒光信號。

• 易操作：光立方模塊的插拔設(shè)計簡單，用戶無需復(fù)雜調(diào)整即可完成更換。

GFP檢測的應(yīng)用場景

GFP作為標記蛋白，常用于以下實驗場景，而Countess 3 FL的光立方技術(shù)能夠提供高靈敏度的檢測支持：

1. 轉(zhuǎn)染效率評估

在基因編輯或轉(zhuǎn)染實驗中，科研人員通常會使用 GFP 作為報告基因。Countess 3 FL能夠：

• 精確計數(shù) GFP 陽性細胞的數(shù)量。

• 快速計算轉(zhuǎn)染效率（GFP 陽性細胞數(shù)/總細胞數(shù)）。

2. 熒光標記細胞的篩選

通過 GFP 標記特定細胞亞群（如腫瘤細胞或免疫細胞），Countess 3 FL可快速識別 GFP 陽性細胞并輸出數(shù)量比例，為細胞分選和后續(xù)實驗提供數(shù)據(jù)支持。

3. 基因表達分析

GFP常用于監(jiān)測目標基因的表達水平。Countess 3 FL結(jié)合其熒光檢測功能，能夠高效量化 GFP 表達的強度與細胞數(shù)量。

4. 細胞追蹤與動態(tài)研究

在細胞追蹤實驗中，GFP用于標記細胞遷移或分化行為。Countess 3 FL的熒光模塊能夠捕捉標記細胞的實時狀態(tài)，并提供數(shù)據(jù)分析。

Countess 3 FL的檢測流程（以GFP為例）

1. 樣本制備：

• 將含有 GFP 標記的細胞樣本制備為懸液，濃度推薦為 1 × 10? 至 1 × 10? 個細胞/mL。

• 根據(jù)實驗需求，可加入臺盼藍進行活力分析。

2. 樣本加載：

• 使用專用計數(shù)載片，取 10 µL 樣本并加載至載片中，確保樣本分布均勻。

3. 選擇檢測模式：

• 插入含 GFP 檢測功能的光立方。

• 在儀器界面選擇 GFP 通道（470/510 nm）進行熒光檢測。

4. 結(jié)果讀取與分析：

• 儀器自動對樣本進行圖像捕獲和熒光分析，顯示 GFP 陽性細胞的數(shù)量和總細胞數(shù)。

• 系統(tǒng)自動計算 GFP 陽性比例，并生成數(shù)據(jù)報告。

5. 數(shù)據(jù)存儲與導(dǎo)出：

• 將實驗結(jié)果通過 USB 導(dǎo)出為 Excel 文件或高清圖像，用于后續(xù)分析或歸檔。

Countess 3 FL光立方支持的熒光染料

除了 GFP 外，Countess 3 FL還支持以下常見熒光染料：

• RFP（紅色熒光蛋白）：檢測波長范圍為 535/615 nm。

• DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：用于染色細胞核，檢測波長為 360/460 nm。

• mCherry：另一種紅色熒光蛋白，常用于與 GFP 組合實驗。

科研人員可根據(jù)實驗需求選擇相應(yīng)的光立方，并靈活切換不同的熒光檢測模式。

技術(shù)優(yōu)勢總結(jié)

GFP檢測的核心優(yōu)勢：

1. 靈敏度高：光立方模塊對 GFP 熒光信號的檢測具有靈敏度，即使熒光信號較弱也能準確識別。

2. 多功能性：不僅支持 GFP 標記檢測，還可同時進行細胞計數(shù)和活力分析。

3. 高效性：檢測時間短，每個樣本僅需幾秒即可完成分析。

4. 便捷性：光立方設(shè)計可快速更換，無需復(fù)雜的硬件調(diào)整。

5. 高分辨率成像：支持高清細胞圖像捕捉，實驗結(jié)果更直觀。

Thermo賽默飛 3FL細胞計數(shù)儀光立方應(yīng)用領(lǐng)域

1. 細胞生物學(xué)：研究細胞增殖、分化及遷移。

2. 基因編輯與轉(zhuǎn)染研究：評估轉(zhuǎn)染效率、基因表達水平。

3. 免疫學(xué)與腫瘤學(xué)：篩選 GFP 標記的免疫細胞或腫瘤細胞。

4. 藥物篩選：分析藥物對 GFP 陽性細胞的影響。

Thermo賽默飛 3FL細胞計數(shù)儀光立方總結(jié)

賽默飛Countess 3 FL細胞計數(shù)儀通過其光立方技術(shù)和多通道熒光檢測功能，為 GFP 標記實驗提供了高效、精確、便捷的解決方案。這款儀器不僅提升了細胞計數(shù)和熒光分析的效率，還能滿足各種復(fù)雜實驗需求，是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的實驗室工具。