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線性聚乙烯亞胺PEI MW25000

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線性聚乙烯亞胺PEI MW25000

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上海起發(fā)生物科技有限公司(Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.)屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司(2009年成立)旗下的子公司,成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌,打造國內(nèi)好的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時,把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè),共同創(chuàng)造中國生物制造企業(yè)。

 

 

 

生物試劑,化學(xué)試劑,化工原料等

供貨周期 一個月 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)

基本信息CAS:9002-98-6

分子式:(CH2CH2NH)n

分子量:25,000

熔點:73-75℃

溶解性:溶于熱水,低pH值的冷水,甲醇和乙醇;

不溶于:苯、、yi醚、丙酮

形式:白色固體

生物毒性:未知

安全防護:手套及口罩

存儲:PEI 內(nèi)含自由氨基,建議開封后 4℃干燥保存,減緩氧化過程。

效期:3年 

運輸:常溫

特點大量實驗數(shù)據(jù)反饋,細胞通用性好,有非常好的轉(zhuǎn)染效果,尤其對293,CHO細胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

配置方法

 

 

轉(zhuǎn)染操作流程:(貼壁細胞轉(zhuǎn)染方法)

    1. 接種細胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(BIOHUB Cat#78CL10002)消化細 胞并計數(shù)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置 入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到 70~80%。

    2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升 至室溫。依據(jù)表 1 所示,用 Opti-MEM ITM或其他適合的無蛋白培 養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線 性 PEI 轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批 DNA 比例可 能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性 PEI 轉(zhuǎn)染 試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

    3. 轉(zhuǎn)染細胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI 復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在 無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴 DNA-PEI 復(fù)合 物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

    4. 孵育細胞和分析結(jié)果: 在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染 后最快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。

    5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后,將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

 

轉(zhuǎn)染操作流程:(懸浮細胞轉(zhuǎn)染方法)

 

    1. 轉(zhuǎn)染前準(zhǔn)備:懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中,合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細胞密度(例100mL培養(yǎng)瓶,1X10 6 cells/mL),然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng),2~4小時后可以進行轉(zhuǎn)染。

 

    2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物:DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

 

    3. 轉(zhuǎn)染細胞:PEI-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中,搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測

 

    4. 孵育細胞和分析結(jié)果:轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

 

    5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量,有文獻表明轉(zhuǎn)染后24小時,可以適當(dāng)稀釋細胞,稀釋比例參考范圍(1:11:5之間,可以增加蛋白產(chǎn)量,稀釋效應(yīng)與最佳稀釋比率應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗確定。


產(chǎn)品背景

     BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,分子量分別為 25000 和 40000,78BioPEI40000 相比 25000 轉(zhuǎn)染效率高,但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中,相比于市面上的脂質(zhì)體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達量(無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應(yīng)器),以及更小的細胞毒性、更高的轉(zhuǎn)染效和更高的可 重復(fù)性,并且十分經(jīng)濟的高性價比轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品具有以下特點:

1.轉(zhuǎn)染效率高,細胞毒性低;  蛋白表達量高;

2.節(jié)約成本:BIOHUB 78 PEI轉(zhuǎn)染試劑 ,進口品質(zhì),親民價格,至少能夠降 40% 的轉(zhuǎn)染試劑總成本;

3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉(zhuǎn)染;

4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染;

5.適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;

6. 無機試劑,無動物源成分;

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴格;

8. 工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板,培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應(yīng)器。

注意事項

  1. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

  2. 本產(chǎn)品主要用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

  3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多,詳細用量可試加一點 ,攪拌看看,足夠溶解就行,不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分,溶解不充分會影響后續(xù)的轉(zhuǎn)染效率.

  5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉(zhuǎn)染效果。

 



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