維生素B1測試盒

微量法 100T/96S 

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 

測定意義 

維生素 B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機體正常代謝必須的水溶性-維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用。 

測定原理 

VB1 在堿性條件下還原鐵氰化-鉀生成亞鐵氰化-鉀，亞鐵氰化-鉀與 Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在 704nm 有特征吸收峰。 

自備實驗用品及儀器 

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。 

試劑組成和配制 

提取液：液體 70mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑一：液體 1mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑二：液體 2mL×1 支，4℃保存。 

試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃避光保存。 

試劑四：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑五：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。 

樣本處理 

1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g，加入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4mL，混勻后于25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定（動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30min）。

2.  細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 0.6mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；加蒸餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定。維生素B1測試盒