40104ES Dispase II 分散酶II
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 40104ES
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/4 14:58:04
- 訪問次數(shù) 505
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40104ES |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
Dispase II,中文名分散酶II,一種非特異性金屬蛋白酶,細胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離單細胞,并用于后續(xù)細胞培養(yǎng),如原代細胞的分離,細胞傳代等。另外,Dispase II還可用于消除懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細胞聚集。與其他細胞生物學(xué)常用蛋白酶(如胰蛋白mei、膠原酶、鏈霉蛋白mei等)相比,該酶具有以下優(yōu)勢:1)一種快速有效且溫和的細胞消化酶,對細胞損傷小,且能維持細胞膜完整性;2)來源于細菌,無支原體或其他動物病毒污染;3)穩(wěn)定性強,不受溫度、pH及血清組分的影響;4)可用于多種類型組織和細胞的分離等。
本品非無菌Dispase II,來源于Bacillus polymyxa,使用時需對其除菌處理,用于細胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
產(chǎn)品信息
貨號 | 40104ES60 / 40104ES80 |
規(guī)格 | 100 mg / 1 g |
比活性(Specific Activity) | ≥0.8 U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5) |
單位定義(Unit Definition) | 在溫度37℃、pH值為7.5的條件下,每分鐘水解酪蛋白釋放出相當(dāng)于1 µM(181 µg)酪氨suan的福林陽性氨基酸和肽所需要的酶量,即為一個蛋白酶活性單位,以U表示。 |
最佳pH(pH Optimum) | 6.0-8.5 |
抑制劑(Inhibitors) | EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會抑制dispase活性。 |
激活劑(Activator) | Ca2+,Mg2+,Mn2+,F(xiàn)e2+,F(xiàn)e3+,Al3+。最佳的Ca2+濃度為2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。 |
使用說明
1 母液及工作液配制
1)用50 mM HEPES-KOH緩沖液(pH 7.4, 150 mM NaCl)(60165ES)溶解適量本品凍干粉,配制成10 mg/mL的儲存液,用0.22 µM濾膜過濾除菌。
2)使用時用適當(dāng)細胞培養(yǎng)液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可,用于細胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
【注】不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。
2 組織的解離
1)用無菌的小刀或者剪刀將組織jian成合適大小的組織塊;
2)用無菌PBS清洗組織塊;
3)向上述組織塊中加入Dispase II溶液(工作濃度為0.6-2.4 U/mL),并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。
4)37℃孵育,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離?!咀ⅰ咳舻谝淮问褂迷撁?,可通過細胞計數(shù)來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織,1h即可達到分離目的,但更長時間(如數(shù)小時)的孵育也不會明顯影響細胞活性。
5)如有需要,可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾,以分開單細胞與殘留的組織塊?;蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。
6)離心沉淀細胞,倒掉酶溶液;
7)用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細胞。
3 細胞傳代
1)利用Dispase 溶液(37℃預(yù)熱)浸沒細胞,于37℃孵育5 min;
2)吸除上述溶液,繼續(xù)于37℃孵育10 min;
3)顯微鏡下觀察細胞分離情況,如需要,可進一步孵育15 min;
4)利用細胞培養(yǎng)基懸浮細胞,輕輕旋轉(zhuǎn)使得細胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細胞;
5)換用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞,并按常規(guī)方法進行細胞鋪板。
儲存條件
凍干粉4℃保存,保質(zhì)期2年。儲存液于4℃可穩(wěn)定保存2周,若長期保存,請分裝后于-20℃凍存。避免反復(fù)凍融。
Q: 分散酶II用Hepe緩沖鹽溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl), 括號中是什么意思?可以用其他緩沖液替代嗎?
A: 括號內(nèi),是Hepes緩沖液的組成。建議用推薦的HEPES緩沖液溶解。其他緩沖液沒有驗證數(shù)據(jù)。
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