改良Lowry法蛋白定量試劑盒
| 參考價(jià) | ￥170.00-￥260.00 |
- 公司名稱 上海尚寶生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號(hào)
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2021/7/16 16:11:55
- 訪問(wèn)次數(shù) 526
| 500T | 170.00元 | 999 盒可售 |
| 1000T | 260.00元 | 999 盒可售 |
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500T/1000T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 15269 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅供科研使用 |
改良Lowry法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：T15269
產(chǎn)品規(guī)格：500T/10000T
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
目前常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。
尚寶生物改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色比色物，用分光光度法(酶標(biāo)儀或分光光度計(jì))檢測(cè)750nm處吸光度，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求得待測(cè)蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
產(chǎn)品組成：
產(chǎn)品名稱 | 500T | 1000T | 保存條件 | |
試劑(A): Folin-Ciocalteu Reagent | 5ml | 10ml | 室溫，避光 | |
試劑(B): 改良 Lowry Reagent | B1: Lowry A | 100ml | 2×100ml | 室溫 |
B2: Lowry B | 2ml | 4ml | 室溫 | |
B3: Lowry C | 2ml | 4ml | 室溫 | |
臨用前，按 Lowry A:B:C=50:1:1比例配制改良Lowry Reagent，即配即用。 | ||||
試劑(C): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) | 20mg | 20mg | 室溫 | |
試劑(D): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液 | 1.5ml | 1.5ml | 室溫 | |
試劑(E): ddH2O | 5ml | 10ml | 室溫 | |
自備材料：
1. 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)
2. 96孔板或離心管
操作步驟（僅供參考）：
1. 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。
2. 取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取75μl 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入925μl稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
特別提示：待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測(cè)蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。稀釋后的1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長(zhǎng)期保存。
3. 根據(jù)樣品數(shù)量，按Folin-Ciocalteu Reagent:ddH 2 O =1：1的比例配制 Folin-Ciocalteu工作液，充分混勻。
4. 根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1 的比例配制改良Lowry Reagent工作液，充分混勻。例如取 10ml Lowry A、0.2ml Lowry B、0.2ml Lowry C，配制成10.4ml改良Lowry Reagent工作液。
5. 將1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)用稀釋待測(cè)樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為 300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔。
6. 加40μl待測(cè)蛋白樣品或稀釋液(空白對(duì)照)到96孔板的樣品孔中，如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液相同，無(wú)需在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。
7. 用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。室溫準(zhǔn)確孵育10min。
8. 用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。加蓋以防止液體揮發(fā)，室溫準(zhǔn)確孵育30min
9. 輕輕混勻96孔板，酶標(biāo)儀或微量滴定板讀數(shù)儀測(cè)定750nm處吸光度，也可用分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，檢測(cè)樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得相應(yīng)待測(cè)樣品的蛋白濃度。同時(shí)建議所以樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品)采用三復(fù)孔，求平均值。
注意事項(xiàng)：
1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長(zhǎng)期保存。
2. 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
3. 如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大改良Lowry Reagent工作液的用量使總體積不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：6個(gè)月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。
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