ELISPOT全名為Enzyme-linked Immunospot Assay，其技術(shù)原理與ELISA相似。其實驗設(shè)計是在96微孔培養(yǎng)盤底部披覆PVDF薄膜，用來吸附特殊挑選、且無毒性（不含內(nèi)毒素）的單克隆抗體。靜脈血PBMC細胞經(jīng)適當分離處理后，會被分配到微孔盤上，再接受適當?shù)目乖碳?，并將微孔盤放置于溫箱中過夜培養(yǎng)一段時間。一般而言，記憶型T細胞在受抗原刺激數(shù)小時后會開始分泌細胞因子，此時局部(在緊靠分泌細胞的周圍)分泌出的細胞因子會被PVDF薄膜上特異抗體捕獲。微孔盤中的細胞被移除并清洗后，被捕獲的細胞因子可進一步使用生物素（Biotin）標記的二次抗體來標志，其后再以結(jié)合堿性磷酸酶的生物素，BCIP/NBT 底物孵育后， PVDF 孔板出現(xiàn)“紫色”的斑點表明細胞產(chǎn)生了細胞因子。每個斑點代表每個分泌待測因子的細胞，斑點的多少可以在ELISPOT分析儀上進行自動化技術(shù)或在顯微鏡下進行人工計數(shù)。統(tǒng)計膜上斑點的數(shù)目，除以當初加入孔中的細胞數(shù)目，可以算出陽性細胞的頻率。