PuriMag G-Avidin蛋白磁珠是將來源于蛋清的Avidin蛋白與羧基聚苯乙烯顆粒的共價偶聯(lián)制備的磁性顆粒。Avidin蛋白是雞蛋清和鳥類組織中存在的蛋白質(zhì)。Avidin蛋白是一種富含色氨酸的糖蛋白，對酸或蛋白水解酶的變性具有很強的抵抗力。得到的磁珠是在pH范圍為2至11時穩(wěn)定。它們可用于親和層析純化，測定開發(fā)和免疫沉淀。另外，通過將Biotin摻入一種擴增聚合物中，Avidin磁性顆粒特別適用于物理分離聚合酶鏈式反應中產(chǎn)生的兩條DNA鏈。 PuriMag G-Avidin- Biotin生物分子復合物易于使用磁鐵與未結(jié)合的生物素 - 生物分子分離，因此提供了一種快速，簡潔的方法來標記具有磁性納米顆粒的生物分子。

PuriMag G-Avidin的特點

直徑：200nm
濃度：10mg / ml
配體：抗生物素蛋白（來自雞蛋清）
類型磁化：超順磁性
基質(zhì)：GMA/DVB
表面組密度：1.5  - 2.0μg Avidin/ mg磁珠（每粒子300-400分子Avidin蛋白）

在2-8℃（多3個月）儲存在緩沖液（25mM tris-HCl，0.15M NaCl，0.05％吐溫20,0.09％NaN 3，pH 7.2）中。不要凍結(jié)試劑。

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重要產(chǎn)品信息

生物素化的分子可以用8M鹽酸胍，pH 1.5或用SDS-PAGE樣品緩沖液煮沸從PuriMag G-抗生物素蛋白中洗脫。這些苛刻的洗脫條件可能導致抗生物素蛋白亞基浸入樣品中。另外，抗生物素蛋白可能因這些亞基的喪失而喪失相當大的結(jié)合能力。
注意：這些洗脫條件可能會不可逆轉(zhuǎn)地損害目標蛋白質(zhì)。如果需要使用非變性條件洗脫生物素化分子，請使用單體抗生物素蛋白磁珠，其允許溫和的洗脫條件以回收生物素化的分子而不會受到抗生物素蛋白亞基的污染，并且不會降低樹脂的結(jié)合能力。

•本說明書中包含的協(xié)議是本產(chǎn)品的應用示例。特定應用和系統(tǒng)需要優(yōu)化。

免疫沉淀的程序

A.所需的其他材料
•結(jié)合緩沖液：磷酸鹽緩沖鹽水（例如，0.1M磷酸鹽，0.15M NaCl; pH 7.2）。為減少可能的非特異性結(jié)合，加入0.1％SDS，1％NP-40或0.5％脫氧膽酸鈉。
•生物素化抗體：使用約30μg生物素化蛋白/ mg珠。在結(jié)合緩沖液中制備濃度為0.2-10mg / mL的0.1-1.2mg生物素化抗體。

•洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸•HCl，pH 2.8

B.程序
注意：所需抗原的量和孵育時間取決于所用的抗體 - 抗原系統(tǒng)，并且必須針對每個特定系統(tǒng)進行優(yōu)化。為了適當混合，確?？偡磻w積不能*填充微量離心管。

1.將Avidin磁珠和試劑平衡至室溫。
2.為了形成免疫復合物，將生物素化抗體加入樣品或裂解液中，在室溫下孵育至少30分鐘或在4℃下孵育過夜。
3.輕輕旋轉(zhuǎn)Avidin磁珠瓶，以獲得均勻的懸浮液。將適量的珠漿移液到微量離心管中。磁性分離并丟棄上清液。
4.加入結(jié)合緩沖液洗滌Avidin磁珠兩次，磁力分離2分鐘。丟棄上清液。
5.將免疫復合物添加到珠子中并在室溫或4℃下混合孵育1小時。
6.用結(jié)合緩沖液洗滌抗生物素蛋白結(jié)合的復合物并磁力分離2分鐘。丟棄上清液。重復此洗滌程序至少四次。
7.樣品可以在SDS-PAGE樣品緩沖液中煮沸并電泳用于分析?；蛘撸瑢⑾疵摼彌_液加入到珠子中以回收抗原。如果使用0.1M甘氨酸•HCl，pH 2.8，則通過加入適當?shù)臐饪s緩沖液如1M Tris，pH 7.5（100μL該緩沖液至1mL樣品就足夠）立即去除液體并立即調(diào)節(jié)回收級分的pH。