BY-0350 NCI-N87人胃癌細(xì)胞系
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- 型號(hào) BY-0350
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NCI-N87人胃癌細(xì)胞系
NCI-N87人胃癌細(xì)胞系是 HER2 陽(yáng)性胃癌研究的標(biāo)gan模型，憑借穩(wěn)定的 HER2 高表達(dá)、明確的 TP53 突變及對(duì)靶向藥物的敏感特性，在胃癌 HER2 信號(hào)網(wǎng)絡(luò)解析、耐藥機(jī)制探索及新型療法開發(fā)中發(fā)揮不可替代的作用，為 HER2 陽(yáng)性胃癌的精準(zhǔn)診療提供了關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)支撐。
來(lái)源與背景：該細(xì)胞系于 1985 年從 67 歲男性胃癌患者的腹腔轉(zhuǎn)移灶分離建立，屬于 Lauren 分型中的彌漫型胃癌。在臨床胃癌患者中，HER2 陽(yáng)性率約 15%-20%，這類腫瘤往往具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力，術(shù)后復(fù)發(fā)率較 HER2 陰性者高 30%。與 MKN-45（HER2 陰性）等細(xì)胞系相比，NCI-N87 的du特jia值在于其 HER2 基因擴(kuò)增（拷貝數(shù) 6-8）和蛋白高表達(dá)的穩(wěn)定遺傳特性，wan美復(fù)現(xiàn) HER2 陽(yáng)性胃癌的分子特征，成為首ge被 FDA 認(rèn)可的 HER2 靶向藥物篩選模型，其建立填bu了 HER2 陽(yáng)性胃癌基礎(chǔ)研究的模型空白，至今仍是該領(lǐng)域論文引用率最高的細(xì)胞系之一。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈典型上皮樣，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多邊形，細(xì)胞質(zhì)豐富且含嗜酸性顆粒，細(xì)胞核大而不規(guī)則，核仁清晰可見，核質(zhì)比 1:1.2，約 8% 的細(xì)胞可見雙核，體現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶胃癌的惡性形態(tài)。核心特性包括：HER2 信號(hào)持續(xù)激活，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示膜表面 HER2 分子密度達(dá) 1.2×10?/ 細(xì)胞，是正常胃上皮細(xì)胞的 10 倍，免疫熒光顯示 HER2 在細(xì)胞膜呈簇狀分布，為靶向藥物結(jié)合提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；TP53 R273H 功能缺陷，該突變使 p53 與 DNA 結(jié)合能力下降 70%，導(dǎo)致細(xì)胞對(duì) DNA 損傷劑shun鉑的耐藥性比野生型 p53 細(xì)胞高 2.3 倍；增殖與轉(zhuǎn)移表型，倍增時(shí)間 42 小時(shí)，軟瓊脂克隆形成率 52%，裸鼠尾靜脈注射后肺轉(zhuǎn)移率 65%，腹腔接種后 7 天即可檢測(cè)到腹水，14 天形成肉眼可見腹膜結(jié)節(jié)。傳代時(shí)需用 0.25% yi酶消化 4 分鐘，傳代比例 1:4，連續(xù)傳代 60 次后 HER2 表達(dá)量?jī)H下降 8%，遺傳穩(wěn)定性顯著優(yōu)于其他胃癌細(xì)胞系。
培養(yǎng)條件：zuiyou培養(yǎng)體系為含 10% 熱滅活胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 2mM 谷an酰胺和 1% 雙抗，在 37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境中生長(zhǎng)最佳。細(xì)胞密度需維持在 30%-70%，當(dāng)密度超過(guò) 80% 時(shí)，HER2 磷酸化水平下降 25%，這與細(xì)胞接觸抑制引發(fā)的信號(hào)傳導(dǎo)抑制相關(guān)。對(duì)血清批次敏感，低質(zhì)量血清會(huì)使細(xì)胞凋亡率從 5% 升至 20%，建議使用經(jīng) γ 射線滅活的血清。凍存采用 90% 血清 + 10% DMSO 的凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 24 小時(shí)活細(xì)胞率 91%，48 小時(shí)wan全恢復(fù)增殖活性。
檢測(cè)鑒定：STR 分型與 ATCC 標(biāo)準(zhǔn)圖譜 100% 匹配，排除交叉污染?；驕y(cè)序證實(shí) TP53 R273H 突變（與 35% 的 HER2 陽(yáng)性胃癌一致），無(wú) KRAS、BRAF 突變。免疫組化顯示 HER2（3+）、CK19（+）、MUC5AC（-），符合腸型分化特征。染色體核型分析顯示亞三倍體（眾數(shù) 64），17 號(hào)染色體長(zhǎng)臂擴(kuò)增（含 HER2 基因）和 8 號(hào)染色體三體，熒光原位雜交證實(shí) HER2 基因與 CEP17 比值為 3.2，符合臨床 HER2 擴(kuò)增判定標(biāo)準(zhǔn)。功能驗(yàn)證顯示，曲妥zhu單抗處理 24 小時(shí)可使細(xì)胞周期 G1 期比例從 38% 升至 62%，印證其靶向敏感性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在信號(hào)機(jī)制研究中，通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) HER2 與 EGFR 形成異源二聚體可激活 STAT3 通路，使 VEGF 分泌增加 2.1 倍，揭示 “HER2-STAT3-VEGF” 軸在胃癌血管生成中的作用，該發(fā)現(xiàn)推動(dòng)了抗血管生成藥物與曲妥zhu單抗的聯(lián)合應(yīng)用。在耐藥研究中，建立的曲妥zhu單抗耐藥株顯示 PIK3CA E545K 突變率達(dá) 40%，使用 PI3K 抑制劑 BKM120 可使耐藥細(xì)胞敏感性恢復(fù) 80%，相關(guān)成果已轉(zhuǎn)化為臨床 III 期試驗(yàn)（NCT02054727）。在藥物開發(fā)中，作為 HER2 雙特異性抗體（如 ZW25）的篩選模型，該抗體可使 NCI-N87 異種移植瘤體積縮小 75%，療效優(yōu)于曲妥zhu單抗單藥（45%），目前已獲 FDA 突破性療法認(rèn)定。
與其他胃癌細(xì)胞系相比，NCI-N87 的核心優(yōu)勢(shì)在于其 HER2 通路的天然活化狀態(tài)和對(duì)靶向藥物的可預(yù)測(cè)性響應(yīng)，其藥物敏感性數(shù)據(jù)與臨床 HER2 陽(yáng)性患者的治療反應(yīng)相關(guān)性達(dá) 72%，顯著高于其他模型。通過(guò)該細(xì)胞系的研究，已闡明 12 個(gè) HER2 協(xié)同調(diào)控基因，推動(dòng) 4 種靶向藥物進(jìn)入臨床，為 HER2 陽(yáng)性胃癌的精準(zhǔn)治療奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。
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