BY-0970 HB KC-16(IgG1)小鼠雜交瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0970
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- 更新時(shí)間 2025/7/21 14:53:14
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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HB KC-16(IgG1)小鼠雜交瘤細(xì)胞系
HB KC-16(IgG1)小鼠雜交瘤細(xì)胞系，是單克隆抗體制備領(lǐng)域中具有明確抗體亞型特征的重要模型，以穩(wěn)定分泌 IgG1 型單克隆抗體、高效的抗原識(shí)別能力及良好的體外培養(yǎng)適應(yīng)性為核心優(yōu)勢(shì)，在免疫診斷、抗原表位分析及抗體工程研究中應(yīng)用廣泛，為 IgG1 型抗體的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)與功能研究提供了可靠細(xì)胞資源。
來源與背景：該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物，通過雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)特定抗原免疫的小鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)多次篩選得到能穩(wěn)定分泌 IgG1 型單克隆抗體的細(xì)胞株。IgG1 作為小鼠抗體中占比最高的亞型（約 40%），具有親和力高、易純化及效應(yīng)功能明確的特點(diǎn)，HB KC-16 (IgG1) 細(xì)胞系的建立為獲取標(biāo)準(zhǔn)化 IgG1 型抗體提供了穩(wěn)定來源，自建立以來，在免疫檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化研究中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型雜交瘤細(xì)胞特征，貼壁生長時(shí)呈上皮樣多邊形，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核大而圓，核質(zhì)比約 1:2.1，約 10% 的細(xì)胞可見雙核結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)融合細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)。核心特性突出：IgG1 抗體分泌穩(wěn)定，分泌量達(dá) 11-17μg/10?細(xì)胞 / 24h，連續(xù)傳代 60 次后分泌能力僅下降 6%，遠(yuǎn)優(yōu)于普通雜交瘤細(xì)胞系；抗原結(jié)合特異性強(qiáng)，與靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達(dá) 10?1?M 級(jí)別，與同源抗原交叉反應(yīng)率 < 0.5%，且 IgG1 亞型te有的 Fc 段可與蛋白 A/G 高效結(jié)合，便于純化；增殖能力優(yōu)異，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 48-54 小時(shí)，克隆形成率 45%，腹腔接種 BALB/c 小鼠后，9-15 天可形成腹水，腹水中抗體濃度達(dá) 5-9mg/ml，IgG1 純度超 90%。傳代采用常規(guī)方法處理，傳代比例 1:3-1:5，細(xì)胞密度達(dá) 80% 時(shí)需及時(shí)傳代，過度密集會(huì)導(dǎo)致抗體分泌量下降 25% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：血清適配性嚴(yán)格，需使用低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.15EU/ml），劣質(zhì)血清會(huì)使細(xì)胞活力降低 35%，抗體分泌量減少 42%；無血清培養(yǎng)優(yōu)勢(shì)顯著，在無血清培養(yǎng)基中添加胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等成分，可維持細(xì)胞生長，IgG1 抗體純度提升至 97% 以上，且避免血清中其他抗體的干擾；腹水制備高效，小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷 7 天后，接種 1.2×10?個(gè)細(xì)胞，11-17 天收集腹水，每只小鼠可獲 5-8ml 腹水，腹水經(jīng)蛋白 A 親和層析后，抗體純度達(dá) 99%。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時(shí)貼壁率達(dá) 85%，IgG1 抗體分泌功能恢復(fù) 90% 以上。
檢測(cè)鑒定：經(jīng)微生物檢測(cè)，無細(xì)菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？贵w亞型鑒定明確為 IgG1 型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、免疫共沉淀等方法驗(yàn)證，其分泌的抗體能與靶抗原特異性結(jié)合，解離速率常數(shù)（Koff）低至 1.2×10??/s，顯示高結(jié)合穩(wěn)定性。染色體核型分析顯示染色體數(shù)目 88-98 條，融合親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征，符合雜交瘤細(xì)胞遺傳學(xué)特性。功能驗(yàn)證中，該抗體用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)時(shí)，能特異性識(shí)別細(xì)胞表面靶抗原，陽性率達(dá) 98%，且與 IgG1 亞型對(duì)應(yīng)的熒光二抗結(jié)合效率顯著高于其他亞型。
應(yīng)用領(lǐng)域：在免疫診斷試劑開發(fā)中，基于該細(xì)胞系分泌的 IgG1 抗體構(gòu)建的化學(xué)發(fā)光試劑盒，對(duì)靶抗原的檢測(cè)靈敏度達(dá) 0.15ng/ml，線性范圍覆蓋 5 個(gè)數(shù)量級(jí)，適用于臨床樣本的精準(zhǔn)定量；在抗原表位分析中，利用 IgG1 抗體的高特異性，通過 X 射線晶體衍射技術(shù)解析抗原 - 抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)，成功定位 3 個(gè)關(guān)鍵表位，為疫苗設(shè)計(jì)提供分子基礎(chǔ)。在抗體工程研究中，作為 IgG1 亞型改造的模板，通過 Fc 段修飾可增強(qiáng)其補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）效應(yīng) 2.3 倍，拓展治療性抗體的應(yīng)用潛力。此外，該細(xì)胞系可用于優(yōu)化 IgG1 抗體生產(chǎn)工藝，通過懸浮培養(yǎng)參數(shù)優(yōu)化，抗體產(chǎn)量提升 2-2.8 倍，且糖基化修飾均一性提高，有利于保持抗體功能穩(wěn)定性。
與其他雜交瘤細(xì)胞系相比，HB KC-16 (IgG1) 的優(yōu)勢(shì)在于 IgG1 亞型的明確性、抗體分泌的高穩(wěn)定性及與蛋白 A/G 的高親和性，純化效率比 IgM 型抗體高 3-4 倍。通過該細(xì)胞系的應(yīng)用，已開發(fā)出多種基于 IgG1 抗體的診斷試劑，廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)與科研實(shí)驗(yàn)，為免疫診斷技術(shù)的發(fā)展及 IgG1 型抗體的功能研究提供了重要支持。
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