BY-0754 U14-GFP小鼠子宮頸癌細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0754
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- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/10 13:08:27
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U14-GFP小鼠子宮頸癌細胞系
U14-GFP小鼠子宮頸癌細胞系是通過基因工程技術將綠色熒光蛋白（GFP）基因穩(wěn)定整合到 U14 細胞基因組中建立的熒光標記細胞模型，既保留了親本細胞的惡性生物學特性，又具備實時可視化示蹤能力，在宮頸癌轉移動態(tài)監(jiān)測、腫瘤微環(huán)境互作及藥物療效評估中具有du特jia值。
該細胞系繼承了 U14 細胞的典型形態(tài)特征，同時展現(xiàn)出穩(wěn)定的熒光表達特性。顯微鏡下，細胞呈多邊形或不規(guī)則形，貼壁生長，排列呈片狀，核質比高，細胞核畸形明顯，可見多核現(xiàn)象，胞質豐富且呈嗜堿性，這些形態(tài)與親本 U14 細胞一致，證實 GFP 導入未改變其基本形態(tài)。在熒光顯微鏡下，所有細胞均發(fā)出明亮的綠色熒光，熒光分布均勻，主要定位于胞質，細胞核區(qū)域熒光稍弱，流式細胞術檢測顯示 GFP 陽性率高達 98% 以上。連續(xù)傳代 50 次后，熒光強度無明顯衰減，凍存復蘇后熒光表達仍保持穩(wěn)定，這種高穩(wěn)定性使其能在長期實驗中實現(xiàn)精準示蹤。免疫表型分析顯示，細胞仍高表達 CK17、CEA 等宮頸癌標志物，EMT 相關分子 Vimentin 和 E-cadherin 的表達模式與親本細胞一致，說明熒光標記未影響其腫瘤表型。
體外培養(yǎng)體系中，U14-GFP 細胞的生長特性與功能活性和親本細胞高度一致。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48-72 小時，倍增時間約 36 小時，對數(shù)生長期細胞活力可達 90% 以上。其克隆形成能力與親本細胞相當，軟瓊脂克隆形成率達 33%，且每個克隆均發(fā)出綠色熒光，通過熒光計數(shù)可快速量化克隆形成效率，較傳統(tǒng)結晶紫染色更便捷精準。在侵襲轉移相關實驗中，Transwell 侵襲實驗顯示 24 小時內穿透基質膠的細胞可通過熒光直接計數(shù)，無需染色，結果更客觀，其侵襲能力與親本細胞無顯著差異，證實 GFP 標記未影響細胞的運動與侵襲潛能。
U14-GFP 細胞的核心優(yōu)勢在于其可視化示蹤能力，可實時動態(tài)監(jiān)測宮頸癌的轉移過程。在體外三維培養(yǎng)模型中，借助共聚焦顯微鏡能清晰觀察到細胞伸出偽足穿透基質的動態(tài)過程，熒光標記使細胞的遷移軌跡一目了然，研究發(fā)現(xiàn)細胞沿膠原纖維定向遷移， RhoA 信號通路抑制劑可顯著減少這種定向遷移，使遷移距離縮短 50%。在體內轉移模型中，通過尾靜脈接種 U14-GFP 細胞后，利用活體成像系統(tǒng)可在 7 天內檢測到肺、肝等器官的熒光信號，14 天形成明顯轉移灶，熒光強度隨轉移灶增大而增強，這種無創(chuàng)監(jiān)測方式可在同一動物個體中動態(tài)追蹤轉移進程，克服了傳統(tǒng)解剖檢測的局限性。
在腫瘤微環(huán)境互作研究中，該細胞系為觀察腫瘤細胞與其他細胞的相互作用提供了直觀工具。與巨噬細胞共培養(yǎng)時，熒光標記的 U14-GFP 細胞可清晰顯示其與巨噬細胞的接觸部位，共聚焦顯微鏡下可見兩種細胞形成緊密連接，這種相互作用可促進巨噬細胞向 M2 型極化，同時增強腫瘤細胞的侵襲能力，通過熒光強度分析可量化不同共培養(yǎng)條件下腫瘤細胞的增殖與侵襲活性。在血管生成研究中，U14-GFP 細胞與血管內皮細胞共培養(yǎng)時，可觀察到腫瘤細胞圍繞血管內皮細胞形成簇狀結構，熒光標記使這種 “腫瘤 - 血管” 相互作用的空間關系清晰可見，抗血管生成藥物處理后，這種簇狀結構明顯減少，熒光強度分布更分散。
在藥物療效評估中，U14-GFP 細胞構建的模型可實現(xiàn)藥物作用的可視化監(jiān)測。體外藥敏實驗中，通過熒光強度變化可快速評估藥物對細胞增殖的抑制作用，如shun鉑處理后，熒光強度隨藥物濃度升高而降低，與細胞存活率呈正相關，這種檢測方式可在 96 孔板中實現(xiàn)高通量篩選，較 MTT 法更高效。在體內藥效實驗中，裸鼠皮下接種 U14-GFP 細胞后，通過活體成像可實時監(jiān)測腫瘤體積變化，無需處死動物即可繪制腫瘤生長曲線，shun鉑處理組的腫瘤熒光強度增長速率明顯慢于對照組，抑瘤率計算更精準，同時可通過熒光分布觀察藥物對腫瘤浸潤范圍的影響。
在轉移機制研究中，U14-GFP 細胞幫助揭示了宮頸癌轉移的關鍵步驟。通過原位移植模型，熒光成像顯示腫瘤細胞先在宮頸局部浸潤生長，隨后穿透基底膜進入血管，在肺組織中形成微轉移灶。利用熒光標記的特異性抗體，可在組織切片中同時顯示腫瘤細胞（綠色熒光）和血管內皮細胞（紅色熒光），清晰觀察到腫瘤細胞穿越血管壁的過程，研究發(fā)現(xiàn)這一過程依賴于血管內皮細胞表面 ICAM-1 的表達，抗 ICAM-1 抗體可使肺轉移灶數(shù)量減少 60%。
隨著成像技術的發(fā)展，U14-GFP 細胞的應用不斷拓展。結合雙光子顯微鏡可實現(xiàn)活體動物體內腫瘤細胞的深層成像，觀察腫瘤細胞在組織中的動態(tài)遷移；與熒光共振能量轉移（FRET）技術結合，可監(jiān)測細胞內信號分子的激活狀態(tài)，如在轉移過程中 Src 激酶的活化可通過 FRET 信號變化實時反映。這些技術的結合使 U14-GFP 細胞成為研究宮頸癌轉移分子機制的強大工具，為開發(fā)新型抗轉移藥物提供了更精準的實驗依據(jù)。
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