人抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒

Elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn)，深受廣大用戶(hù)朋友的喜愛(ài)。然而，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，也需要注意很多問(wèn)題。對(duì)此，繪辛生物提醒你，需要遵守一些規(guī)則，才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取得較好的實(shí)驗(yàn)成果。 Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。在Elisa測(cè)定中影響因素較多，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：標(biāo)本因素；試劑因素；操作因素。

人抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 1．樣品稀釋 一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋?zhuān)豢杀苊鈺?huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性。

2．試劑盒平衡 Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃)，一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。

3．樣品和試劑的混勻 在稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。

4．加樣 加樣是一項(xiàng)很重要的步驟。加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。

5．溫育 溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。

人抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒 6．洗板 固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過(guò)程中吸附的非特異成份分離開(kāi)來(lái)，以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。

7．顯色 顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō)，顯色時(shí)間過(guò)短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，空白增高或者非特異性顯色增加。

8．比色 比色要注意波長(zhǎng)的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題。