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《數(shù)字PCR儀校準(zhǔn)規(guī)范》（征求意見稿）發(fā)布
2020年09月09日 09:23:52 來源：化工儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊量：6774

近日，由全國生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)對(duì)口負(fù)責(zé)的《數(shù)字PCR儀校準(zhǔn)規(guī)范》征求意見稿已經(jīng)起草完成，并面向全社會(huì)公開征求意見。該項(xiàng)新的校準(zhǔn)規(guī)范的主要內(nèi)容包括范圍、引用文件、術(shù)語和計(jì)量單位、概述、計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)和復(fù)校時(shí)間間隔等，適用于微滴式、芯片式和微孔式數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)分析儀計(jì)量性能的校準(zhǔn)，對(duì)于其它類型的數(shù)字PCR儀，也可參照本規(guī)范執(zhí)行。

　　【化工儀器網(wǎng) 政策標(biāo)準(zhǔn)】數(shù)字PCR是一種核酸分子定量技術(shù)，主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個(gè)核酸分子模板的反應(yīng)器就會(huì)給出熒光信號(hào)，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號(hào)。根據(jù)相對(duì)比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。
 
　　近些年來，隨著數(shù)字PCR技術(shù)地不斷發(fā)展，Bio-Rad、LIFE Technologies及RainDance等廠家相繼推出技術(shù)較為成熟的數(shù)字PCR產(chǎn)品。如今，分子生物學(xué)技術(shù)也在迅猛發(fā)展，各實(shí)驗(yàn)室數(shù)字PCR儀數(shù)量迅速增加，這些儀器除了被用于基礎(chǔ)科研外，還被廣泛地用于第三方醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、出入境和疾控中心的樣品檢測(cè)。
 
　　根據(jù)《ISO/IEC 17025:2005 檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，檢測(cè)校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中使用的分析設(shè)備都應(yīng)當(dāng)經(jīng)過檢定或校準(zhǔn)，以保證儀器的準(zhǔn)確性和測(cè)定結(jié)果的可溯源，從而保證各個(gè)檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室在不同時(shí)間、不同地點(diǎn)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確、可比。數(shù)字 PCR儀由于沒有檢定規(guī)程或者校準(zhǔn)規(guī)范，無法對(duì)儀器進(jìn)行檢定校準(zhǔn)，已經(jīng)成為當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可工作中的瓶頸之一。
 
　　有鑒于此，近日，由全國生物計(jì)量技術(shù)委員會(huì)對(duì)口負(fù)責(zé)的《數(shù)字PCR儀校準(zhǔn)規(guī)范》征求意見稿已經(jīng)起草完成，并面向全社會(huì)公開征求意見。該項(xiàng)新的校準(zhǔn)規(guī)范的主要內(nèi)容包括范圍、引用文件、術(shù)語和計(jì)量單位、概述、計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)和復(fù)校時(shí)間間隔等，適用于微滴式、芯片式和微孔式數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)分析儀計(jì)量性能的校準(zhǔn)，對(duì)于其它類型的數(shù)字PCR儀，也可參照本規(guī)范執(zhí)行。
 
　　數(shù)字PCR儀的計(jì)量特性有溫度示值誤差、溫度均勻度、升降溫速率、拷貝數(shù)濃度重復(fù)性、熒光強(qiáng)度重復(fù)性等，具體內(nèi)容如下表1所示：
 
　　儀器校準(zhǔn)的環(huán)境條件為：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)滿足儀器安裝的要求，不得存在強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾，校準(zhǔn)時(shí)實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)當(dāng)控制在(15~30)℃，相對(duì)濕度不大于 70%。另外，校準(zhǔn)時(shí)的測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、溫度校準(zhǔn)裝置、電子天平、移液器以及配制校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所需純水。需要注意的是，校準(zhǔn)前需將數(shù)字PCR儀開機(jī)預(yù)熱30min，確保儀器達(dá)到正常工作狀態(tài)。
 
　　以上校準(zhǔn)規(guī)范為首次發(fā)布，在制定過程中主要參考了JJF1527-2015 《聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》。
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