手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備采購(gòu)面臨新規(guī) 節(jié)能與碳排放審查全面升級(jí)
上新 | 熱穩(wěn)定、低宿主殘留的RNase HII來(lái)咯！
上新 | 熱穩(wěn)定、低宿主殘留的RNase HII來(lái)咯！
圖1. RNase HII反應(yīng)原理示意圖
RNase HII應(yīng)用
依賴于Rnase HII的PCR (rhPCR)
rhPCR引物是在高度保守的目標(biāo)寡核苷酸序列區(qū)域內(nèi)插入1段RNA堿基序列，形成DNA-RNA-DNA的堿基序列，并且該引物的3'-末端被化學(xué)基團(tuán)封阻，該引物未切割時(shí)無(wú)法正常延伸。Rnase HII可以特異性地水解DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈中的RNA，但不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵。因此只有當(dāng)封閉引物與靶DNA互補(bǔ)時(shí)，Rnase HII才能使DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈在RNA堿基的5'-側(cè)發(fā)生裂解，留下具有3'-羥基的DNA寡核苷酸，該3'-羥基DNA寡核苷酸能夠起到引物的作用，從而允許引物延伸。rhPCR利用Rnase HII的特異性作用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA-rN-DNA/DNA雜合鏈的特異水解，從而實(shí)現(xiàn)引物的準(zhǔn)確延伸，提升了反應(yīng)的特異性。
圖2. rhPCR原理圖[1]
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)
將RNase HII應(yīng)用于LAMP擴(kuò)增體系后，能有效解決LAMP技術(shù)的假陽(yáng)性問(wèn)題，為L(zhǎng)AMP技術(shù)更加廣泛的應(yīng)用于臨床診斷。如圖3所示，利用Rnase HII引物激活的LAMP方法(PA-LAMP)，當(dāng)引物與靶ssDNA配對(duì)時(shí)，Rnase HII酶特異性切割引物上的RNA，激活引物，從而允許引物延伸，實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增，有效減少體系中的假陽(yáng)性。
圖3. PA-LAMP原理示意圖[2]
翌圣RNase HⅡ
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
E. coli基因組DNA殘留< 0.01copies/1 U
圖4. E. coli基因組DNA殘留檢測(cè)
95℃耐熱性測(cè)試
對(duì)RNase H II (Cat#14539ES)進(jìn)行95℃加熱0~45 min后，測(cè)試RNase HII的酶活結(jié)果，結(jié)果表明翌圣RNase HII加熱45 min后，酶活幾乎沒(méi)有損失。
圖5. 95℃耐熱測(cè)試
無(wú)核酸外切酶、切口酶、RNase殘留
圖6. 核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果
相關(guān)產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
rhPCR、LAMP | RNase HII(2 U/μL) | 14539ES |
rhPCR | Hieff UNICON® Hotstart E-Taq DNA Polymerase, 5 U/μL | 10726ES |
RT-LAMP | Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) | 14402ES |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐熱逆轉(zhuǎn)錄酶 | 11111ES |
該廠商推薦產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其他方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心