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2023
10-10

常見的RNA提取方法
不同組織RNA提取原理是將細胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白，DNA等雜質(zhì)，最終獲得高純度RNA產(chǎn)物的過程。那么你知道常見的RNA提取方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提（有機試劑抽提）原理：將被裂解的生物樣本，混勻離心分相以后，RNA在上層水相，DNA，蛋白質(zhì)在中間層，下層有機相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA，漂洗后得到RNA。優(yōu)點：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。缺點：用到苯酚、氯仿等有毒試劑。二、硅膠柱法抽提原理：硅基質(zhì)材料在一定的
2023
10-09

如何選擇合適的DNA提取試劑盒？
實驗室工作中，經(jīng)常會需要用到純化的DNA，這時我們通常需要使用一個商業(yè)的DNA提取試劑盒對目的DNA進行分離純化。那么我們該如何選擇合適的DNA提取試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數(shù)DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實驗室培養(yǎng)的細胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某些應(yīng)用的試劑盒。例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血紅蛋白會污
2023
10-09

DNA提取試劑盒的原理是什么？
如今，大多數(shù)實驗室都使用商業(yè)DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質(zhì)量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA）。那么DNA提取試劑盒的原理是什么呢？讓我們一起來看看吧！一、RNA和DNA提取裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白
2023
10-09

ELISA試劑盒的原理是什么？
你知道ELISA試劑盒的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。Elisa試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如:Elisa檢測試劑盒、ElisaKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異
2023
10-09

ELISA檢測方法有哪些？
根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測的具備條件的不同，所使用的檢測方法也不同，那么ELISA檢測方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待測血清中的響應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后加酶標(biāo)記抗體，與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原的含量。二、競爭法首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯
2023
10-09

什么是文庫構(gòu)建？
基于NGS測序的諸多優(yōu)點，故此技術(shù)在全球測序市場上占有著絕對的優(yōu)勢位置，而新一代測序（NGS）文庫制備是一體化測序流程中的一個關(guān)鍵因素，那么什么是文庫構(gòu)建呢？讓我們一起來看看吧！基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因組文庫，后者包括cDNA文庫。文庫構(gòu)建的基礎(chǔ)是將目標(biāo)RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來，并通過機械破碎或者是酶切法對其進行片段化。如果前面提取的是RNA樣本，則需
2023
10-08

不同動物細胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的？
你知道不同動物細胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的嗎？讓我們一起來看看吧！一、培養(yǎng)的貼壁動物細胞的蛋白質(zhì)抽提步驟1.從貼壁細胞培養(yǎng)瓶中小心傾去培養(yǎng)液。2.預(yù)冷的PBS清洗貼壁的細胞2次，小心傾去PBS。3.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液，5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液）。4.細胞瓶中加入預(yù)冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（107個細胞中加入1ml抽提試劑；5×106個細胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動5分鐘。5.用一預(yù)冷的橡膠和塑料細胞刮將培養(yǎng)瓶壁
2023
10-08

質(zhì)粒構(gòu)建實驗影響因素有哪些？
質(zhì)粒構(gòu)建是指選定的目的外源基因（DNA）先要經(jīng)過PCR擴增。隨后用限制性內(nèi)切酶分別切割載體和外源DNA片段，再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接，轉(zhuǎn)入宿主細胞。最后經(jīng)過篩選鑒定出正確的重組克隆質(zhì)粒，實現(xiàn)目的基因在宿主細胞內(nèi)的正確表達。那么質(zhì)粒構(gòu)建實驗影響因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、載體的選擇在選擇克隆載體時應(yīng)注意以下幾點：①具有自主復(fù)制能力，拷貝數(shù)高；②攜帶易于篩選的選擇標(biāo)記；③含有多種限制酶的單一識別序列，以供外源基因插入；④載體應(yīng)盡可能?。ǎ?5kb），便于導(dǎo)入細胞和進
2023
10-08

影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些？
熒光原位雜交是一門新興的分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、固定液的選擇及固定時間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12～48h，其它固定液對實驗結(jié)果可能產(chǎn)生一定的影響。②組織標(biāo)本離體后應(yīng)盡快固定，較大標(biāo)本切開固定。如樣本固定不及時，熒光信號會減弱。（尤其環(huán)境溫度較高時更應(yīng)及時固定）③固定液體積應(yīng)不少于標(biāo)本體積的10倍，否則固定不充分，容易出現(xiàn)無信號
2023
10-08

流式細胞周期檢測的常見問題有哪些？
你知道流式細胞周期檢測的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣本制備注意事項1.根據(jù)不同的檢測細胞調(diào)整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養(yǎng)環(huán)境，注意一定要無菌的環(huán)境培養(yǎng)。2.培養(yǎng)細胞時，以對數(shù)期處理為宜，避免細胞量過少導(dǎo)致收集細胞量不足或者細胞量過多導(dǎo)致細胞開始大量死亡造成的實驗誤差。3.流式檢測細胞周期上機檢測所需收集細胞量較多，收集細胞時盡量多收集一些4.流式檢測對細胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷、弄破細胞。5.本實驗對細胞離心，重懸次數(shù)較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷
2023
10-08

【干貨】一文了解vero細胞培養(yǎng)全流程
Vero細胞系是連續(xù)非整倍體細胞，連續(xù)細胞系可以經(jīng)過多次分裂而不衰老，非整倍體是指細胞中的染色體數(shù)目與通常的不同。與其它普通哺乳動物細胞不同，Vero細胞還有干擾素分泌缺陷的特點，當(dāng)被病毒感染時，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對于其它來源的干擾素仍有正常的反應(yīng)。一、基本信息細胞名稱：Vero非洲綠猴腎細胞細胞別稱：VERO;Verdareno細胞形態(tài)：上皮細胞樣生長特性：貼壁生長組織來源：正常腎培養(yǎng)基：MEM+10%FBS+1%PS生長條件：①氣相：95%空氣+5%二氧
2023
10-07

原代細胞培養(yǎng)的分離注意事項有什么？
分離是原代細胞培養(yǎng)的重要步驟之一，那么你知道原代細胞培養(yǎng)的分離注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、組織塊培養(yǎng)法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2.加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3.當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。4.為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)
2023
10-07

原代細胞取材的注意事項有哪些？
取材作為原代細胞培養(yǎng)過程中至關(guān)重要的一步，那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、皮膚和粘膜主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。二、內(nèi)臟和實體瘤1.無菌環(huán)境；2.熟悉所需組織的類型和部位；3.要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結(jié)締組織。三、血液細胞一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結(jié)等)分離細胞，取材時應(yīng)注意抗凝。四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養(yǎng)，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可
2023
10-07

WB實驗常見問題有哪些？如何解決？
WesternBlot雖是實驗室zui常用的蛋白分析技術(shù)，但是由于它步驟繁瑣、操作流程長、影響因素多，所以導(dǎo)致在實驗過程中會遇到各式各樣的問題，那么你知道WB實驗常見問題有哪些呢？該如何解決呢？讓我們一起來看看吧！一、目標(biāo)條帶沒有信號原因分析：1.樣品中可能含有蛋白酶，使蛋白樣品分解成小分子。2.目標(biāo)蛋白濃度過低（低于檢測下線）。3.轉(zhuǎn)膜時間太短導(dǎo)致目標(biāo)蛋白沒有充分轉(zhuǎn)移到膜上，或者轉(zhuǎn)膜時間過長導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)穿。4.一抗的特異性不佳，導(dǎo)致一抗無法識別目標(biāo)蛋白。解決方法：1.添加蛋白酶抑制劑。2.加大上
2023
10-07

你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段，那么你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！以Trizol法提取組織細胞為例：1.提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5~106個細胞加1mlTrizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞；2.將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml
2023
10-07

RNA提取成功的要點有哪些？
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復(fù)凍融。2.提取時組織要充分研磨，組織量不宜過少，更不宜過多。3.加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時間，使樣本充分裂解。4.在用Trizol法提取時，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬不能提取到中間層，否則會導(dǎo)致嚴重的基因組DNA污染。5.洗滌時
2023
09-28

Alzet滲透泵2002使用注意事項
Alzet滲透泵2002是一種小型、可植入式的膠囊滲透泵，可應(yīng)用于小鼠、大鼠及其他實驗動物研究。該泵無需進行外部連接或頻繁處理，就能以恒定的速率持續(xù)給藥1天到14天的時間。Alzet滲透泵2002泵送率為0.5μl/hr(±0.1μl/hr)，持續(xù)時間為14天，泵容量為200μl。Alzet滲透泵2002由3個組件組成，分別是：灌注管(fillingtube)、流量調(diào)節(jié)器(flowmoderator)、泵(pumpbodymaterials)。為了更好的使用Alzet滲透泵2002，在使用時，有
2023
09-28

Alzet滲透泵工作原理
Alzet滲透泵(ALZETOsmoticPump)，又名為Alzet植入式膠囊滲透壓泵，是一種高效動物給藥系統(tǒng)。Alzet滲透泵體積小巧，常用于大鼠、小鼠及其他實驗動物的藥劑泵送。Alzet滲透泵共有12個型號的產(chǎn)品，可根據(jù)給藥時間、給藥速度來選擇合適的型號，具體的產(chǎn)品型、泵容積、泵送速率見下表：Alzet滲透泵可植入動物的皮下或者腹腔內(nèi)，亦可連接上導(dǎo)管，輸送到動脈或者靜脈內(nèi)，從而到達局部組織或者器官，從歷年的文獻來看，科學(xué)家們已經(jīng)將Alzet滲透泵應(yīng)用到了如腦、脊髓、肝臟、脾臟等器官或組織，
2023
09-28

流式細胞術(shù)的應(yīng)用有什么？
流式細胞術(shù)（FCM）是一種對處在快速流動中的細胞或其它生物微粒逐個進行多參數(shù)的快速定量分析和分選的技術(shù)。它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、熒光標(biāo)記技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、細胞免疫學(xué)于一體，按照細胞或生物顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì)，同時具有分析和分選細胞或生物顆粒的功能。那么你知道流式細胞術(shù)的應(yīng)用有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、流式細胞術(shù)科研應(yīng)用1.細胞凋亡檢測在正常細胞中，細胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）位于胞漿側(cè)。細胞凋亡中期，PS外翻。AnnexinV是一種Ca2+依賴的對PS具有高度親和力的磷脂
2023
09-28

Alzet Osmotic Pumps說明書
AlzetOsmoticPumps有多種尺寸、持續(xù)時間和流量可供選擇，以滿足廣泛的研究需求。當(dāng)每種型號的滲透泵送速率在制造時是固定的時，可通過改變每臺滲透泵中填充的藥劑濃度來調(diào)整輸送藥劑的劑量。如果動物足夠大，可同時植入多個滲透泵，以獲得比單滲透泵更高的輸送速率。對于更長時間的輸送，滲透泵可以連續(xù)植入，而不會產(chǎn)生不良影響。更多請參照AlzetOsmoticPumps的使用說明書。一、動物注意事項AlzetOsmoticPumps可根據(jù)以下動物尺寸指南植入皮下或腹腔。AlzetOsmoticPum

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