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中級(jí)會(huì)員 | 第5年
細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程2016/12/13
一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試,具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。二、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過(guò)一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)簡(jiǎn)介2016/12/13
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞內(nèi)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(*轉(zhuǎn)染)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩類。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體存在。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染則指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例;化學(xué)介導(dǎo)方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
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