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細胞培養(yǎng)方法2020/04/02

1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時以上;3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗:將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,分裝成支置-20度保存;5.培養(yǎng)箱應(yīng)

解析抗原抗體受那些要素影響2020/03/31

在常見實驗?zāi)刂?，有很多不當操作情況下都會影響抗原—抗體反響的，以elisa試劑盒為例，為您解析這些要素別離來自哪里：抗原—抗體結(jié)合進程可分為兩個階段：一階段為特異性結(jié)合階段，此階段反響迅速，在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)完成，但無可見反響；第二階段為可見反響階段，歷時數(shù)分鐘至數(shù)小時，此階段易受以下要素的影響。一、電解質(zhì)抗原和抗體別離有對應(yīng)的極性基團，能彼此吸附并由親水性變?yōu)槭杷?。電解質(zhì)的存在可使抗原—抗體復合物失掉電荷而凝聚，呈現(xiàn)可見反響。故免疫學實驗中多采用生理鹽水稀釋抗原或抗體。二、酸堿度抗原—抗體反

影響ELISA試劑盒試驗成果的要素2020/03/24

ELISA試劑盒，即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點，并具有操作簡潔、無放射性危害的優(yōu)點，因此多年來廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機構(gòu)的試驗室中。影響ELISA試驗的要素有如下三方面：一、試劑盒?1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價下降或失活，成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高，對雜質(zhì)的反響靈敏度也高，試驗中空白對照OD值偏高或假陽性；2、酶結(jié)合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。二、試驗儀器1、加樣器是否通過校正，酶免測定血

抗體特異性都有哪些斷定2020/03/20

抗體的特異性斷定抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的辨認才干?？贵w的特異性高，它的辨認才干就強。衡量特異性一般以交叉反應(yīng)率來標明。交叉反應(yīng)率可用競賽克制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原別離做競賽克制曲線，核算各自的結(jié)合率，求出各安閑IC50時的濃度，并按公式核算交叉反應(yīng)率。假如所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時，標明這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0，即該血清的特異性較好。拓展延伸：1.抗體的效價斷定不管是用于確診仍是用于醫(yī)治，制

血清中常見的幾個問題2020/03/16

保存血清的方法？血清應(yīng)保存在-5°C至-2°C。然而，若存放于4°C時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。如何避免沉淀物的產(chǎn)生?1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20°C至4°C至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20°C至37°C)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時

血清保存的六點注意事項2020/03/13

1.需要長期保存的血清有必要儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因而，血清在凍入低溫冰箱前，有必要預(yù)留一定體積空間，不然易發(fā)作污染或玻璃瓶凍裂。2.一般廠商供給的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。3.瓶裝血清凍結(jié)需采用逐漸凍結(jié)法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡)

酶聯(lián)免疫吸附法2020/03/11

原理：可用于測定抗體，也可用于檢測杭原。其基本原理是采用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶連接，然后通過酶與底物發(fā)生顏色反響，用于定量測定。酶聯(lián)免疫吸附法測定的對象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）；②酶符號的抗原或抗體（符號物）；③酶效果的底物（顯色劑）。ELISA進程包括：抗原吸附在固相載體上，這個進程稱為包被，加待測抗體,再加相應(yīng)酶符號抗體，生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復合物，再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。借助分光光度計的光吸收核算抗體的量。依

關(guān)于血清的使用與儲存2020/03/03

準確的使用及保存血清，才能使血清發(fā)揮應(yīng)有的作用；今天，我司要為您解說血清的使用與儲存：1.使用前處理:大部分血清在使用前必需滅活處置，即56°C30分鐘。滅活的目標是去除血清中的補體身分，避免補體對細胞發(fā)作毒性同化。血清始末滅活也會喪失一些對細胞無利的成分，如發(fā)展因子，是以也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于造就，這樣做的前提是確認血清中不含補體身分。對付一些品德高的胎牛血清和新牛血清能夠斟酌不經(jīng)滅活直接用于細胞造就。2.使用濃度:自從有了分化造就基，血清就是作為一種添加身分與分化造就基稠濁使用，使用

胎牛血清入冬的貯存方式2020/01/14

胎牛血清入冬貯存怎么辦？根據(jù)我司的經(jīng)歷分析，胎牛血清由于其產(chǎn)品的特性，在貯存的時分需求多加留意，過錯的操作會使胎牛血清失掉活性在實際應(yīng)用的時分應(yīng)留意以下幾點：1、首先在解凍和貯存的時分應(yīng)該將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。2、因此，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止重復凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。3、長時間貯存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）或許聚集而形成沉淀或可見的混濁。

試劑盒試驗環(huán)境的重要性2020/01/09

1.為推遲光學部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。2.操作環(huán)境溫度應(yīng)在15℃至40℃之間，環(huán)境濕度在15%~85%之間。3.儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。4.操作時電壓應(yīng)堅持穩(wěn)定。5.操作環(huán)境空氣清洗，避免水汽、煙塵。6.堅持枯燥、潔凈、水平的作業(yè)臺面，以及滿足的操作空間。7.儀器應(yīng)放置在無強磁場和煩擾電壓的方位。ELISA試劑盒運用留心：1.不相同廠家出產(chǎn)的試劑盒因出產(chǎn)工藝和操作方法略有不相同，有必要依照所用試劑盒嚴格操作，否則簡略發(fā)生查看效果的不確定性.2.若不相同批號試劑的不相同組分(A液

在細胞傳代培育過程中的原則、注意事項2019/12/30

在生物醫(yī)學試驗中常常會用到細胞系，指原代細胞培育物經(jīng)傳代成功后所繁衍的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培育細胞。細胞系是經(jīng)過細胞傳代或續(xù)代培育是將細胞從現(xiàn)有的培育物分隔或分出來開端新的培育，并參加新鮮培育液來促進擴增的常用手法?？墒羌毎蹬c新分離的或原代細胞的培育條件相類似，但也有一些根本不同的當?shù)兀海?）每個細胞系需求其特定的成長因子混合物（2）與原代細胞比較，它們的成長需求更嚴密的監(jiān)測，由于使它們無限成長的突變同時也會形成它們很快到達過度成長。因而，當細胞系成長到了簡直覆蓋整個培育器皿底部，也

常見ELISA試劑盒試驗技能要點2019/12/26

1.準備好所有試驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等；2.依據(jù)檢測標本數(shù)量確認所需試劑的量；3.按闡明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑；4.標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法試驗者，留意低溫保存。試驗中為了確認信號和背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)試驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當范圍內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書慣例供給的范圍進行操作。規(guī)范品的制造：對于每種細胞因子應(yīng)仔

細胞呈現(xiàn)黑點怎么處理?2019/12/23

一旦您在細胞培育的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培育基是否混濁，然后，在鏡下觀察培育細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。假如細胞被污染，微生物則會大量繁衍，培育基就會迅速變黃、變混濁。污染包含細菌污染、支原體污染等。假如在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點呈現(xiàn)前相比。沒有任何變化，那么，黑點的呈現(xiàn)可能與以下幾種狀況有關(guān)：1、細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;2、血清質(zhì)量不好，反復凍融的成果;3、制造培育基的pH值偏高，不宜細胞生長;4、制造培育基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑

Elisa試劑盒的使用說明2019/12/19

由于elisa辦法的操作簡單，現(xiàn)在越來越的科研工作者在做試驗時都會挑選elisa辦法，一些剛觸摸的elisa辦法的朋友們估量對elisa試劑盒不怎么了解，今日聯(lián)碩來說明elisa試劑盒的使用說明：1.在貯存及孵育過程中防止將試劑暴露在強光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸騰和污染，試劑防止遭到微生物的污染，由于蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的成果。2.小心汲取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在汲取標本/規(guī)范品，酶結(jié)合物或底物時，個孔與后一個孔加樣之間的時間距離如果太大，將會導致不同的“預(yù)孵

聯(lián)碩講堂：血清的一些主要作用2019/12/19

●提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)?！裉峁┘に睾透鞣N生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等?！裉峁┙Y(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用?！裉峁┐俳佑|和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。●對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨

ELISA試驗操作失敗的主要原因2019/12/16

我們知道，ELISA測定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在查驗中除正常反響外，有時常可見到一些過錯結(jié)果(即假陽性或假陰性)，那么致使試驗不成功的主要原因有哪些咧？一：標本的影響：溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易發(fā)生假陽性。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍色，發(fā)生假陽性。所以嚴峻溶血標本禁用。二、標本受細菌污染：因菌體

聯(lián)碩淺談:血清熱滅活的問題2019/12/03

血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長達30分鐘是*沒有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實驗室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，多數(shù)實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負面影響，在我們的技術(shù)熱線中常被提到的就是否該對血清進行熱滅活，下面我們就對胎牛血清的熱滅活進行一些探討和解釋。熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和L

聯(lián)碩淺談:血清的首要效果以及鑒別方法有哪些?2019/11/25

我們大家都知道血清，指血液凝結(jié)后，在血漿中除掉纖維蛋白原別離出的淡黃色通明液體或指纖維蛋白原已被除掉的血漿。那么,我們提取血清的首要目的有哪些呢?又應(yīng)該來如何鑒別血清呢?聯(lián)碩為您具體解說:血清的首要效果:1、供給基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞成長有必要的物質(zhì)。2、供給激素和各種成長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化ke的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。成長因子如成纖維細胞成長因子、表皮成長因子、血小板成長因子等。3、供給結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白

胎牛血清的保存和使用2019/11/20

胎牛血清的保存方法：需要長期保存的胎牛血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。胎牛血清的使用方法：1、瓶裝胎牛血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1

酵母感受態(tài)細胞的制備和保存2019/09/20

酵母，如釀酒酵母、裂殖酵母和畢赤酵母，通常用于生物學實驗研究。酵母是易于培養(yǎng)的單細胞真核生物，他們的基因和蛋白質(zhì)與哺乳動物具有很好的相似性，所以是的生物模型。酵母細胞用于研究基因功能，蛋白質(zhì)相互作用，細胞通路等，也是大規(guī)模異源蛋白表達和小分子生產(chǎn)的宿主，在發(fā)酵，釀造和制藥行業(yè)等起著*的作用。涉及酵母的常見的實驗有酵母雙/三雜交系統(tǒng)，突變體篩選庫和同源重組，等等。一、為什么我們需要酵母感受態(tài)細胞?通常，在實驗過程中需外源DNA引入到酵母細胞。引入基因片段（線性ssDNA或質(zhì)粒）是通過酵母細胞的轉(zhuǎn)化